【摘要】  目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在翼状胬肉中的表达及发病过程中的作用。方法 采用免疫组化Elivision法检测20例翼状胬肉、10例正常结膜中iNOS的表达。结果 20例翼状胬肉中iNOS的阳性表达率为80 %(16/20)，正常结膜中iNOS的阳性表达率为0(0/10)。iNOS阳性表达两组间差异有显著意义，P<0 01。结论 iNOS在翼状胬肉中的高表达，提示iNOS可促进血管形成，可能与翼状胬肉的发生、发展有关。因此，抑制iNOS可望成为治疗翼状胬肉，减少术后复发的新思路。

　　【关键词】  诱导型一氧化氮合酶；翼状胬肉；血管形成；免疫组织化学

　　近年来的研究发现, 一氧化氮合酶(NOS)活性的增高与肿瘤血管生成有关[1]。翼状胬肉的发生发展其发病机制目前仍不十分清楚，翼状胬肉是一组织增生性疾病，以新生的纤维血管组织自球结膜生长侵入角膜为其特点。有细胞异常增殖和凋亡，与肿瘤有相似之处。它的形成、发展和术后复发需要新生血管化参与。翼状胬肉组织中是否存在NOS的高表达，鲜见报道。本研究通过检测翼状胬肉中iNOS的表达水平，探讨iNOS在翼状胬肉发病机制中的作用。
　　
　　1  材料和方法

　　1.1  一般资料

　　选择本院2004—2005年门诊及住院的20例翼状胬肉患者的手术标本。静止期5例，进行期12例，复发性3例，其中男13例，女7例，年龄37~65岁，病程11个月~9年；对照组为同期手术的10例正常结膜组织，年龄35~62岁，所有病例均无其他角膜、结膜疾患。标本经10%甲醛固定、常规脱水、石蜡包埋。

　　1.2  方法

　　标本经固定后，常规脱水石蜡包埋，作3 μm 连续切片，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。切片脱蜡至水化，3%过氧化氢孵育10 min ，消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，PBS浸泡3×2 min，微波炉抗原修复（95~98 ℃），自然冷却至室温，加入1：100 NOS单克隆抗体，37 ℃ 孵育30 min，或4 ℃ 过夜，用普通小鼠IgG及PBS代替一抗作阴性及空白对照，PBS冲洗3×2 min，滴加增强剂（A），37 ℃ 孵育30 min，PBS 冲洗3×2 min，滴加生物素聚合物（B），37 ℃ 孵育30 min，PBS 冲洗3×2 min。二氨基联苯胺显色，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜观察照相。

　　1.3  染色结果判断
 
　　阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。 每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野， 计算每个视野阳性细胞率， 取平均值作为该标本的阳性细胞率。NOS表达结果分为阴性（－）：无阳性细胞；弱阳性（+）：阳性细胞率<50%；强阳性（++）：切片中阳性细胞率>50%。

　　1.4  统计学处理

　　结果应用χ2检验。所有数据在SPSS11.0统计软件上进行，以P<0.05为差异有显著性。

　　2  结果

　　iNOS主要表达于翼状胬肉组织细胞的细胞浆和细胞膜内，少数表达于细胞核，iNOS表达阳性的细胞分布无明显规律，但静止期、进行期和复发性翼状胬肉的阳性细胞分布不同，静止期阳性细胞仅定位于上皮基底部，且呈散在分布，进行期阳性细胞增多，且向表层发展，复发性翼状胬肉阳性细胞明显增多，定位于上皮全层，染色最深。iNOS在翼状胬肉的阳性表达率为80%（16/20）。iNOS在正常结膜细胞内无阳性表达，阳性表达率为0（0/10）。iNOS在翼状胬肉及正常结膜的表达存在显著性差异（P<0.001），详见表1。表1  iNOS在翼状胬肉及正常结膜的表达情况（略）

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