姚志斌   俞鸿   呼建文   张劲松

中国医科大学附属第四医院，中国医科大学眼科医院，辽宁省晶状体学重点实验室   上海众信生物技术有限公司   上海生命科学院新生命生物科技有限公司   110005

目的：观察和分析人正常晶状体蛋白质组成和其相应代谢通路、相互作用网络。

方法：将完整的晶状体预分离，通过一维的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质、胶内酶解后的肽段通过反相液相色谱再次分离，用线性离子阱串联质谱仪对洗脱出的肽段进行分析。得到的原始数据采用SEQUEST算法筛选结果。运用Kyoto Encyclopaedia of Genes and Genomes等生物信息学方法分析鉴定出的蛋白质的代谢过程和蛋白质相互作用的网络。

结果：共鉴定出人正常晶状体蛋白质871个，鉴定出许多未知的晶状体蛋白质及其亚型。经鉴定的晶状体蛋白质主要参与的生物学通路：糖酵解、磷酸戊糖、果糖-甘露糖、谷胱甘肽代谢途径，促分裂原活化蛋白激酶信号传导、磷脂酰肌醇信号系统、泛素介导的蛋白酶体系统和细胞周期。构建了晶状体蛋白质相互作用网络图，其中重要蛋白是网格蛋白，膜收缩蛋白（α，β)，波形蛋白，14-3-3 protein(β/α，ζ/δ，ε，γ，η)，TSC2蛋白，层粘连蛋白，分裂原活化蛋白激酶，alpha-A-晶状体蛋白，热休克蛋白质（α，β)，3-磷酸甘油醛脱氢酶，鸟嘌呤核苷释放蛋白-1，胶原蛋白 IVα-2。

结论：本研究成功地构建了人正常晶状体蛋白质表达谱，极大丰富了晶状体蛋白质数据库。通过生物信息学分析首次构建人正常晶状体蛋白质相互作用网络，并提供人正常晶状体主要代谢通路和蛋白质相互作用网络中关键蛋白。