表1 不同时段各组晶状体混浊度量化比较(略)
Table 1 Comparison of the lens opacity ratio at different stages
统计方法:t检验;①P<0.05,与正常对照组比较;②P<0.05,与模型组比较
a.正常对照组b.模型组 c.阳性对照组d.生物碱高剂量组e.生物碱低剂量组f.多糖高剂量组g.多糖低剂量组
图1 培养24h后各组晶状体混浊度比较(×25)(略)
Figure 1 The lens opacity in different groups after culturing for 24h(×25)
2.2 各组药物对晶状体水溶性蛋白、GSH含量及MDA、TSOD活性的影响 由表2可见,模型组与正常对照组比较,水溶性蛋白含量、GSH含量、TSOD活性均显著降低,MDA活性显著升高(均P<0.05),而阳性对照组、生物碱组、粗多糖组可显著升高水溶性蛋白、GSH含量以及TSOD活性,降低MDA活性,各给药组与模型组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。生物碱高剂量组水溶性蛋白含量显著高于阳性对照组(P<0.05),GSH含量除多糖低剂量组显著低于阳性对照组外(P<0.05),其他各实验组与阳性对照组比较均无显著性差异(P>0.05);TSOD活性除生物碱低
表2 各组晶状体水溶性蛋白、GSH含量及MDA、TSOD活性变化比较(略)
Table 2 Comparison of the contents of watersoluble protein ,GSH,and the activity of MDA,TSOD in different groups
统计方法:t检验;①P<0.05,与正常对照组比较;②P<0.05,与模型组比较;③P<0.05,与阳性对照组比较剂量组和多糖低剂量组显著低于阳性对照组外(P<0.05),其他各组与阳性对照组比较均无显著性差异(P>0.05);MDA活性除生物碱高剂量组显著低于阳性对照组(P<0.05)外,其他各组与阳性对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。
3 讨论 晶状体的氧化损伤是目前常用的白内障研究模型,而H2O2是很好的氧化损伤诱导剂。体内抗氧化系统功能下降或氧化作用增强均可导致眼组织的损伤,诱发或促进白内障的形成[10-11]。而活性氧簇,如H2O2 、超氧阴离子、单态氧、氢氧根等可以引起很多生物学变化,最终使晶状体的水不溶性蛋白增加而形成白内障[12]。GSH是一种抗氧化酶,在晶状体中含量较高,对晶状体起着多方面的重要作用[13]。SOD和MDA常常相互配合用以反映组织细胞氧化/抗氧化系统功能的平衡。此外,氧化损伤等因素致晶状体蛋白质分子构型发生改变,造成可溶性蛋白质含量的减少和不可溶性蛋白质含量的增高[14],而不溶性蛋白质聚集,即导致晶状体光散射作用增加,即失去透明性。本研究采用体外构建氧化损伤白内障模型的方法,对金钗石斛总生物碱和粗多糖的抗白内障作用进行探讨。结果显示,模型组可溶性蛋白含量显著低于正常对照组,而各用药组可显著缓解可溶性蛋白的减少,生物碱高剂量组尤其明显;同时,金钗石斛的提取物总生物碱和粗多糖均可提高晶状体GSH含量及SOD活性,同时降低MDA活性,即通过提高晶状体抗氧化能力而达到抑制白内障的作用。 石斛具有抗白内障的作用早已被证实,但其抗白内障的确切有效成分至今仍未见报道。本实验证实,金钗石斛的两种药效部位(总生物碱和粗多糖)在体外可通过减轻晶状体的氧化损伤而抑制白内障的进程,且总生物碱的效果优于粗多糖。然而,金钗石斛化学成分复杂,据文献报道,其总生物碱含量达0.4%~0.6%,种类有30多种,多糖含量也高达4%,并以各种不同的形式存在[15],因此,下一步研究可从这两种粗提物入手,进一步挖掘金钗石斛抗白内障的确切有效成分,并阐明其抗氧化的具体反应过程,这对于抗白内障的药物研究以及金钗石斛药用价值的开发都有着重要的意义。
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