【摘要】 目的 对2%毛果芸香碱微乳滴眼剂与2%毛果芸香碱滴眼液在兔房水中的药代动力学进行对比研究。方法 健康白兔60只，随机分成20组，10个实验组，10个对照组，每组3只兔（6只眼）。对各实验组双眼结膜囊内准确滴入2%毛果芸香碱微乳滴眼剂50 μl，对各对照组双眼同法滴入2%毛果芸香碱滴眼液50 μl，分别于给药后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min时抽取房水。用二氯甲烷提取房水中的药物，采用反相高压液相色谱（high pressure liquid chromatography, HPLC）法测定房水中的药物浓度。结果 用反相HPLC法可以将毛果芸香碱与其它杂质分离，最低检测浓度为0.01 mg/L。2%毛果芸香碱微乳滴眼剂或滴眼液50 μl滴眼后，除5 min时间点外，其余各时间点毛果芸香碱微乳滴眼剂治疗组的房水药物浓度较毛果芸香碱滴眼液治疗组明显增高（P=0.000 3～0.042)。微乳滴眼剂的药-时曲线下面积是滴眼液的3倍，微乳滴眼剂的生物利用度比滴眼液高2倍。用微乳滴眼剂后6 h，房水中仍可测出毛果芸香碱的浓度，而用滴眼液后3 h，房水中已测不出毛果芸香碱的浓度。结论 将毛果芸香碱滴眼液的剂型改为微乳滴眼剂可明显提高毛果芸香碱的生物利用度，增强疗效，减少用药频率，提高青光眼的治疗指数，具有较好的应用前景。
Ocular pharmacokinetics of pilocarpine micron emulsion in rabbits
XU Yan, CHEN Zuji, SONG Jiezhen, et al. Henan Institute of Ophthalmology, Zhengzhou 450003
【Abstract】 Objective To compare the pharmacokinetics of pilocarpine micron emulsion with generic pilocarpine solution in the aqueous humor.Methods 60 albino rabbits were used and were divided into 20 groups, each consisting of 3 animals. 10 groups received 2% generic pilocarpine 50 μl as controls; 10 groups received 50 μl of 2% pilocarpine micron emulsion in the conjunctival sac. The aqueous humor was withdrawn at 5, 10, 30, 40, 60, 90, 120, 180, 240 and 360 min. after instillation. The drug was extracted from aqueous humor with dichloromethane. The drug was analyzed by reversed phase high pressure liquid chromatography(HPLC).Results Pilocarpine micron emulsion therapy gave higher aqueous humor concentration of the drug than drops at all time periods tested except 5 min. time point (P=0.0003～0.042). The area under curve of micron emulsion was 3 times as much as that of drops. There was a two-fold increase in ocular bioavailability of pilocarpine due to the therapy with micron emulsion. Measurable amounts of drug following 2% micron emulsion were still observed at 360 min. while drug levels at 180 min. following 2% drop therapy were nil.Conclusion Our study results demonstrated significantly increase in ocular bioavailability of pilocarpine due to the therapy with micron emulsion. Our finding indicates that a novel topical preparation of pilocarpine incorporated in micron emulsion might serve as a long acting antiglaucoma agent, and less frequent applications are necessary with it than with conventional drops.
【Key words】 Pilocarpine Pharmacokinetics Chromatography, high pressure liquid
毛果芸香碱滴眼液在降低眼压治疗各型青光眼方面疗效显著，是临床不可缺少的药物之一。但该剂型有很多缺点，药物滴眼后立即被结膜囊中的泪液稀释，并很快从泪道排出，因此生物利用度低，作用时间短暂，需反复频繁滴眼，易发生局部毒性反应及病人依从性差等一系列问题。为了延长毛果芸香碱滴眼液的药物作用时间，增强毛果芸香碱的眼内通透性及生物利用度，减少用药次数，降低毒性，提高疗效，近年来对毛果芸香碱的长效剂型进行了许多研究，目前国外正在研究的剂型有脂质体、胶束溶液(micellar solution)、微乳及微粒体等［1-4］。微乳近年来作为药物载体受到医药界的重视［2，3，5-7］。国内对这方面的研究刚起步,在眼科制剂方面尚未见有关报道。我们于1997年起开始研制毛果芸香碱微乳滴眼剂，并对毛果芸香碱微乳滴眼剂与毛果芸香碱滴眼液在兔眼房水中的药代动力学进行了对比研究。
材料与方法
一、材料及制剂
硝酸毛果芸香碱为进口原料分装，符合英国药典；甲醇、磷酸氢二钾、二氯甲烷为国产分析纯。将硝酸毛果芸香碱制备成2%的毛果芸香碱微乳滴眼剂，另制备2%毛果芸香碱滴眼液作对照。
二、方法
1.实验动物：健康白兔60只，雌雄兼用，体重2～3 kg，随机分成20组，10个实验组，10个对照组，每组3只兔（6只眼）。
2.滴眼及房水标本采集：用微量取样器分别对各实验组家兔双眼结膜囊内滴2%毛果芸香碱微乳滴眼剂50 μl，对各对照组家兔双眼结膜囊内滴2%毛果芸香碱滴眼液50 μl。房水标本采集时间为给药后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min。所有样品均储存于-20℃下，以备测定。
3.样品提取方法：取房水200 μl，加二氯甲烷4ml，振荡2 min。以3 000 r/min离心10 min。取有机层，50℃氮气流下吹干，加入流动相100 μl振荡4 min溶解，取50 μl注入液相色谱仪中，将峰面积代入回归曲线，求得所测试样品浓度。
4.反相HPLC法测定：采用的高压液相色谱仪为日本岛津LC-10A型。色谱条件：色谱柱为Spherisorb C18， 200.0 mm×4.6 mm,粒度5 μm；流动相为0.073 mol/L磷酸氢二钾-甲醇（80：20）；流速1.5 ml/min，检测波长为215 nm，柱温为55℃，进样量为50 μl。峰面积与浓度做线性回归，标准曲线的浓度系列为0.2、0.5、1.0、2.0 、4.0和8.0 mg/L,最低检测限为0.01 mg/L,以外标法进行定量。用 0.5、1.0和2.0 mg/L的标准溶液进行方法精密度和重现性考察；用0.5、1.0和2.0 mg/L 3种浓度进行回收率实验。
5. 统计学处理：采用t检验，以P＜0.05作为差异有显著性标准。
结果
一、一般情况
2%毛果芸香碱微乳滴眼剂及2%毛果芸香碱滴眼液滴眼后，各时间点均未出现眼睑痉挛、结膜充血、结膜水肿及流泪等刺激症状。
二、毛果芸香碱的色谱特征
毛果芸香碱的保留时间为5.6 min，空白不干扰测定。以峰面积对浓度进行线性回归，房水中毛果芸香碱的浓度在0.2～8.0 mg/L范围内线性关系良好，r=0.999 9。
三、HPLC测定标准溶液的精密度和重现性（表1）
表1 HPLC测定标准溶液5次的日内精密度和日间重现性
*相对标准差
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