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按下述公式计算各实验药物对人Tenons囊成纤维细胞增殖抑制率：
抑制率＝［（对照组OD值－实验组OD值)／对照组OD值］100％
实验组及对照组的OD值、抑制率均用SPSS统计软件包9.0版本单因素方差分析(analysis of variance，ANOVA）进行统计学分析，P＜0.05有显著意义。对第2次人重组γ-干扰素实验结果，除106U／ml浓度组外，均去除最大值及最小值再进行有关统计分析。
图1 首次实验实验组及对照组OD值
2 结果
图1示第1次实验各实验组及对照组OD值。单因素方差分析显示106及1U／ml人重组γ-干扰素的OD值较对照组高，有显著性差异(P＜0.05)；其它浓度的γ-干扰素OD值与对照组之间则无显著差异(P＞0.05)(OD值升高或降低）。10，1，0.1,0.01mg/L MMC的OD值较对照组降低，有显著性差异(P＜0.05)，0.001mg／L MMC和对照组之间无显著差异(P＝0.413)。1000mg／L，100mg／L 5-Fu的OD值较对照组间低，有显著差异(P＜0.05)，其它浓度5-Fu和对照组间无显著差异(P＞0.05)。
图2示第2次实验OD值。单因素方差分析显示106U／ml，10－1U／ml IFN OD值较对照组高，有显著性差异(P＜0.005)，102U／ml，103U／ml of IFN OD值较对照组低，有显著差异(P＜0.05)，其它浓度IFN和对照组之间无显著差异(P＞0.05)。
图2 重复实验IFN组及对照组OD值
MMC和5-Fu对人Tenons囊成纤维细胞的生长起抑制作用，而IFN-对人Tenons囊成纤维细胞的生长起双向调控作用，两次实验中102，103，104U／ml IFN-γ对人Tenons囊成纤维细胞起抑制作用，106，105，10U／ml起促进作用。IFN-γ的最高抑制率只有10.88%。MMC的抑制率由5.73%到46.9%，5-Fu的抑制率为12.49%到38.92%(图3)。单因素方差分析显示第1和第2次实验IFN的抑制率无显著差异(P＝0.838)，MMC和5-Fu之间无显著差异(P＝0.351)，而两次实验IFN的抑制率均与MMC及5-Fu有显著差异(P＜0.005)。
图3 实验药物对纤维细胞抑制率比较
3 讨论
噻唑兰比色法是测定活细胞线粒体酶活性的一种快速、灵敏、准确的方法，用于检测药物对细胞增殖的影响［9］。我们以该方法所进行的实验结果显示，人重组IFN-γ抗人Tenons囊成纤维细胞增殖的能力和MMC及5-Fu相比非常弱。Latina等的结果也表明，经IFN-γ处理过的人Tenons囊成纤维细胞增殖速度与对照组细胞相似［2］。因此，IFN-γ抗疤痕化可能是由于抗纤维细胞增殖以外的原因。Low等显示IFN-γ可抑制体外培养的人Tenons囊成纤维细胞合成胶原［10］。Latina显示IFN-γ除可作用于Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原外，还可改变含肌动蛋白纤维及胞内外纤维连结蛋白的分布［2，7］。根据以上结果，IFN-γ抑制抗青光眼术后滤过区疤痕化的作用需通过进一步的体内试验方能下定论。
本实验还发现既往研究中未报道的现象，即高浓度及低浓度IFN-γ非但对HTCF的增殖没有抑制作用，反而有一定程度的促进作用。这种所谓双向调控的机制有待进一步阐明。Finbloom［11］对人重组IFN-γ进入胞内后的代谢、对Fc受体数目的上调作用以及抗人单核细胞样U937细胞系增殖作用进行了相关研究。发现37℃时，IFN-γ在10min内即可与全部受体结合。但是，在30min内，与受体结合的IFN-γ只有一半可进入胞内。IFN-γ在胞内的停留时间只有60～120min。最后，60%～70%的IFN-γ完全降解。Fc受体呈现最大反应有80%是在受体结合率为30%时发生的。每天重复以中等浓度IFN-γ作用于U937细胞可诱出抗增殖效应。该结果提示高低浓度的IFN-γ均不足以激发抗增殖作用。其促增殖作用是否与生长因子或调控细胞周期的因素有关尚需进一步研究证实。
本文受国家自然科学基金(基金编号：39700153）、广东省科委自然科学基金(基金编号：970082）资助
参考文献
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