李越   王雨生   惠延年   韩静   赵炜   朱洁

第四军医大学西京医院眼科   710032

目的：通过特异性抑制20S蛋白酶体活性，分析其对RPE细胞衰老进程的影响及可能的机制。

方法：用不同浓度的蛋白酶体特异性抑制剂MG132处理体外传代至第2~4代的人RPE细胞，检测短暂抑制、持续抑制或抑制后恢复三种情况下的RPE细胞的老化和衰老特征，并进一步测定MG132干预后RPE细胞的蛋白酶体活性和氧化蛋白质水平，分析20S蛋白酶体活性抑制对人RPE细胞老化进程的影响效应及其可能的作用机理。

结果：亚毒性剂量的MG132处理后，人RPE细胞出现不可逆的生长停滞、形态和排列失规则、胞浆空泡化和β-半乳糖苷酶染色增强的衰老表型，这一诱导衰老效应具有剂量和时间依赖性。进一步的蛋白酶体功能检测和细胞内氧化蛋白质定量分析提示，5 μM浓度的MG132首先抑制RPE细胞中的PGPH活性和CT-L活性，并显著降低20S蛋白酶体对FITC标记酪蛋白的降解能力，但T-L活性对这一浓度的MG132较为不敏感。同时，这一浓度的MG132并不引起RPE细胞内氧化蛋白质水平的明显增加。10 μM浓度的MG132可显著抑制蛋白酶体的3种水解活性，并使RPE细胞内的氧化蛋白质含量显著升高。

结论：蛋白酶体特异性抑制剂MG132可诱导人RPE细胞提前出现不可逆的衰老表型，这一诱导效应的原因至少包括氧化蛋白质聚集和蛋白酶体对多种细胞因子调节障碍，后者所占的比重很可能超过预期，仍待进一步探索。