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三、小梁细胞超微结构改变
在比较糖皮质激素性青光眼患者和正常人小梁细胞时，我们发现两种细胞的光镜形态及免疫组化特性极为相似；电镜观察可见患者小梁细胞虽保持微绒毛、吞饮小泡、长的缝隙连接、多核仁等结构，但细胞的微绒毛、吞饮小泡、胞浆的溶酶体等均较正常人小梁细胞减少（图3,4）。
图1 糖皮质激素性青光眼未融合的小梁细胞 绿色滤光片×100 图2 糖皮质激素性青光眼小梁细胞免疫组化染色阳性 Anti-NSE×400 图3 糖皮质激素性青光眼小梁细胞的超微结构 ×16000 图4 正常人小梁细胞的超微结构 ×20 000
讨论
人类的房水流出途径包括经小梁网的Schlemm管途径和经睫状体上腔与脉络膜上腔的葡萄膜巩膜途径，而Schlemm管途径最为重要［3］。小梁细胞的数量、结构和功能的改变是开角型青光眼发病的细胞学基础［4-6］。小梁细胞充当流出道的内皮细胞，作为结缔组织细胞参与小梁网不同部位细胞外基质的分泌和代谢，作为吞噬细胞可清除引起房水流出口阻塞的碎屑；小梁细胞功能活动的异常将导致房水流畅性的改变，引起眼内压升高［7］。由于从青光眼患者获得的小梁细胞，带有更多的疾病信息，对这些小梁细胞的研究所得的结论将更准确、客观地反映疾病的发生过程，因而青光眼小梁细胞体外培养研究在青光眼发病机制的研究中作用更加重大。
总结近年的培养经验，我们认为糖皮质激素性青光眼患者小梁细胞体外培养与正常人小梁细胞培养相似，仅取材和接种方法不同，取材是细胞培养的关键步骤。小梁组织仅存在于房角的狭窄区域，在行小梁切除术时，巩膜内板层应尽可能向后，直至暴露出带色素的小梁区；组织块取出后，应避免手术器械直接损害小梁区；小梁组织上的色素作为组织块内皮面的标记，以保证接种时小梁面贴壁。由于小梁细胞的损害与青光眼的病程有关，晚期或绝对期患者小梁组织上存活的小梁细胞可能较少，培养不易成功；老年人小梁细胞的生命力不够强，因而选择病情轻、年龄小的患者，培养容易成功。另外，抗代谢药物在手术中的应用，对培养结果也有影响，应避免药物污染的器械接触组织块或巩膜瓣下使用这类药物。
由于小梁细胞属内皮细胞，无独特的标志，培养的小梁细胞至今仍然未有完善的鉴别标准和分离、纯化方法，因此培养的小梁细胞必须与邻近可能出现的成纤维细胞、角膜内皮细胞等污染细胞相鉴别［8］。我们将糖皮质激素性青光眼患者小梁组织培养的细胞，经光镜、电镜形态和免疫组化鉴定为小梁细胞。
通过比较分析，我们发现糖皮质激素性青光眼患者小梁细胞的超微结构发生改变。正常的在体小梁细胞具有活泼的吞噬功能［9,10］，以清除小梁网上的色素、大分子物质、组织碎屑、氧化产物等，保持房水流出道的通畅，而吞饮作用则是小梁细胞转运房水的主要形式；小梁细胞的功能活动与细胞表面的微绒毛、胞内框架结构和胞浆溶酶体等有关。糖皮质激素性青光眼患者小梁细胞的微绒毛、吞饮小泡、胞浆中的溶酶体较正常人小梁细胞减少，这些超微结构的改变是否提示小梁细胞的吞噬和吞饮功能下降，进而引起细胞外基质堆积和流出阻力增大，导致眼内压升高，尚待进一步研究。
总之，只要选材适当、取材准确，小梁切除术所得的组织块同样可以用于小梁细胞体外培养；糖皮质激素性青光眼患者小梁细胞体外培养方法的建立，不但使小梁细胞培养体系更加完善，且由于青光眼患者的小梁细胞能更准确、更客观地反映疾病的发生过程，因而在青光眼发病机制研究中必将起着更加重大的作用。
作者单位：葛坚（510060广州，中山医科大学中山眼科中心)
林明楷（510060 广州，中山医科大学中山眼科中心)
卓业鸿（510060 广州，中山医科大学中山眼科中心)
郑健梁（510060 广州，中山医科大学中山眼科中心）
参考文献
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