2.2  TUNEL检测

    与对照组比较，给药组大鼠25 d时TUNEL检测阳性细胞数目减少，差异有统计学意义(t=3.41,P<0.05)。给药组大鼠不同时间比较，35 d时阳性细胞核数目最多，差异有显著性（t=3.05~4.13，P<0.05）。见表2。

    3  讨    论

    自1857年DANDER等首次报道视网膜色素变性以来，众多学者对其进行了广泛的研究。但该病一直没有有效的治疗方法。目前，对视网膜色素变性的治疗方法主要有：基因治疗、感光细胞移植和药物干预。前两种方法因目前尚难解决的一些技术问题使其应用受到很大限制，而药物干预则通过影表1  两组RCS大鼠感光细胞数目比较表2  两组RCS大鼠TUNEL检测阳性细胞数比较响视网膜色素变性形成过程中一些代谢变化显示了良好的应用前景。

    目前，枸杞子的研究给RCS大鼠视网膜色素变性的治疗带来了很大的希望。2002年哈佛大学研究小组报道，玉米黄素（zeaxanthin，枸杞子的成分之一）在视网膜内的高含量具有预防视网膜细胞凋亡的作用，玉米黄素的保护作用只在视网膜发挥作用，与血液中的玉米黄素浓度没有直接关系［7］。香港大学2006年的研究结果显示，枸杞子对青光眼RGCs有神经保护作用，枸杞子可以显著减少RGCs 的凋亡作用［8］。其实，枸杞子的眼科治疗作用在东方传统医药中一直受到重视［8］。近年的研究显示，核黄素和玉米黄素两种成分在光中毒模型和老年性黄斑变性模型中，对光感受器有保护作用，能显著减少RGCs的变性，这种作用可能是通过阻断一氧化氮引发的神经细胞凋亡作用实现的［9］。

    本文结果显示，给药组RCS大鼠出生后25、35 d时外核层感光细胞的数目比对照组多，差异有统计学意义，提示LBA在RCS大鼠感光细胞变性的早期对感光细胞有保护作用。由于RCS大鼠视网膜色素变性是Mertk基因突变引起的［10］，主要表现为RPE不能吞噬感光细胞外节脱落的膜盘，以致膜盘碎片积聚在视网膜下，阻碍了氧从脉络膜到视网膜的扩散，视网膜的低氧状态导致了感光细胞的变性。虽然本文苏木精-伊红染色结果提示LBA对RCS大鼠视网膜变性早期感光细胞有保护作用，但研究中还显示，RCS大鼠出生25 d以后，LBA对感光细胞变性基本不起作用，这可能是由于RCS大鼠生后25 d感光细胞发生凋亡，35 d是感光细胞凋亡的高峰期。随着感光细胞的凋亡，外核层细胞数目减少，对氧的需求量减少，RCS大鼠很有可能随着外核层细胞数目的减少而摆脱低氧状态。

    目前普遍认为，虽然视网膜色素变性具有多种致病基因参与，但发病的最终共同途径是感光细胞的凋亡。通过干预细胞凋亡过程，有可能缓解病程进展。CHONG 等［11］在大鼠中动脉栓塞模型实验中，采用TUNEL检测法对凋亡神经元进行标记，发现全身注射LBA可大量减少脑缺血半影区阳性标记的凋亡神经元。本文TUNEL检测结果显示，给药组大鼠视网膜在25 d时凋亡的细胞数比对照组减少，余时间段两者差异无显著意义。提示LBA对感光细胞早期凋亡可能有抑制作用。我们以前的研究结果显示，RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达有关［12］，这种保护作用可能与细胞凋亡有关，值得进一步深入研究。

    视网膜色素变性是一种发病年龄早，病程进展慢，对视力影响大的遗传性致盲眼病。多种突变基因干扰了感光细胞内光电转化反应和能量代谢，并通过不同途径激活视网膜色素上皮细胞及感光细胞内程序化死亡过程。但迄今为止，视网膜色素变性一直没有有效的药物治疗。本实验结果显示，LBA能抑制感光细胞早期的凋亡。相信随着研究的进一步深入，LBA对变性神经元的保护作用将被深入了解，并可能作为一个重要的视网膜神经保护剂在临床中得到广泛应用。

    【参考文献】

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    ［5］寿宁. 宁夏枸杞研究［M］. 银川:宁夏人民出版社, 1999:48-59.

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    ［7］THOMSON LR, TOYODA Y, LANGNER A, et al. Elevated retinal zeaxanthin and prevention of light-induced photoreceptor cell death in quail［J］. Invest Ophthalmol Vis Sc, 2002,43(11):3538-3542.

    ［8］沈雪英,蒋亚申. 中药枸杞子的药理研究进展［J］. 军队医药, 2000,10(2):11-15.

    ［9］LEUNG ET A L, LEUNG M L, TSO W, et al. Absorption and tissue distribution of zeaxanthin and lutein in rhesus monkeys after taking Fructus lycii extract［J］, Invest Ophthalmol Visual Sc, 2001,42:478-481.

   ［10］D'CRUZ P M, YASUMURA D, WEIR J, et al. Mutation of the receptor tyrosine kinase gene Mertk in the retinal dystrophic RCS rat［J］. Hum Mol Gene, 2000,9:645-647.

    ［11］CHONG Z Z, LIN S H, KANG J, et al. Erythropoietin prevents ischemic neuronal apoptosis through the serine-threonine kinase AKt1 ans cytochrome c release［J］. Sos Neurosci Abst, 2001,31:391-392.

    ［12］迟焕芳,乔淑红,曹文强. RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达的关系［W］. 青岛大学医学院学报, 2003,39(2):123-126.

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