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1.2.3 病理片制作
分别在术后依照实验设计时间使用水合氯醛深度麻醉大鼠后，取对照组及缺血1 h和2 h组大鼠左眼，中性甲醛固定，乙醇梯度脱水后石蜡包埋，做5 μm厚切片,普通苏木精伊红染色，镜检。另外，术后直接取对照组一只大鼠左、右眼，做大体对照。
2 结 果
实验组18只大鼠造模成功16只，缺血1 h组1只术中出血死亡，1只术中呼吸困难死亡。从病理切片可见，与正常对照组相比，实验组大鼠视网膜缺血1 h主要表现为视网膜水肿，其中以神经纤维层和内网状层最明显，厚度增加明显，染色较淡，缺血2 h视网膜水肿加重，内核层细胞排列紊乱，可见白细胞浸润；再灌注6 h后视网膜水肿开始减退，神经纤维层水肿开始减轻，造模成功。
3 讨论
目前，通过各种实验研究探索缺血再灌注损伤机制以及减轻或防止其损伤的方法很多，但比较常用的方法有如下两种。①血管结扎模型：血管结扎最常用的方法是手术分离暴露眼球后部，用尼龙线或丝线将视网膜中央动脉、静脉，连同视神经一起结扎[3,4]。此外，也可在手术显微镜下剪开视神经鞘膜，分离出视网膜中央动脉，单独钳夹视网膜中央动脉[5]。还有同时钳夹双侧颈总动脉造成视网膜缺血者[6]，但此法对实验室及器械要求高，手术要求一定的技巧性且对大鼠损伤较大，不适合初学者实验。②升高眼内压模型:该模型是由前房刺入连有灌注瓶的灌注针头，通过升高灌注瓶的高度，使眼内压通过体循环收缩压达到一定阈值，造成整个视网膜的缺血，是目前常用的一种缺血再灌注模型[7]。此法较简单，适合初学者使用，但再灌注形成缓慢，对角膜损伤较重，角膜容易水肿,不利于眼底观察，且存在较严重的眼内感染。
本实验采取线栓法制备大鼠缺血再灌注损伤模型，以期能在前人研究基础上，努力探索一种比较符合临床视网膜缺血病理过程的实验方法。从本实验结果来看，缺血1 h后视网膜苍白、水肿，2 h后水肿加重，内核层细胞排列紊乱，证实视网膜发生缺血，而恢复再灌注后，可见水肿开始消退，以上病理改变证实本实验方法可以模拟临床上视网膜缺血再灌注损伤过程，达到实验预期目的。但是，由于是初步探索，本实验不可避免存在着一些缺点。①术中易出血：由于大鼠颈外动脉分支较多且较细小，术中分离时容易发生出血，要注意及时电凝,避免较多出血,大量出血易导致大鼠死亡。②神经损伤：由于喉返神经及迷走神经与颈外动脉的分支联系紧密，分离时要注意防止牵拉过度或损伤,以免引起大鼠喉痉挛和呼吸心率变化，造成大鼠死亡。个人体会是实验中可以在靠近此两神经的小血管处预置牵拉缝线，分离时牵拉缝线，尽量使血管与神经分开一定距离。③缺乏一定解剖资料：对于目前尚无大鼠头颈部血管解剖文献的支持，线栓的直径和插入长度较大依赖实验者的探索，本实验所标记的线栓长度，乃预实验探索的结果。
综上所述，尽管本实验存在着一定的缺陷，但能较好地模拟视网膜缺血再灌注的临床过程，特别是对于眼动脉阻塞或狭窄所引起的视网膜缺血，仍具有一定的价值。其缺点尚需在以后的实验过程中继续探索并加以完善。
【参考文献】
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[6]OSBORNE N N, LARSEN A, BARNETT N L. Influence of excitatory aminoacids and ischemia on rat retinal choline acetyl transferasecontaining cells[J]. Invest Ophthalmo Vis Sci, 1995,36(8):16921700.
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