杨静   谭浅

湖南省湘雅医院   410008

目的：研究II型重组腺相关病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因对体内兔晶状体上皮细胞的转染情况，以及对角膜和虹膜组织的毒性作用，为rAAV携带目的基因防治后囊混浊提供实验依据。

方法：将36只白兔36只眼随机分为A、B、C和D四组，其中A组为对照组，四组均行右眼白内障常规超声乳化吸出术，术毕分别向B、C、D三组的晶状体囊袋内注入基108，109，1010个病毒颗粒，向A组晶体囊袋内注入0.1mlBSS。术后行裂隙灯及角膜内皮镜检查；分别于术后第1周、第2周、第4周处死各组兔子3只，取出囊袋作铺片，行DAPI染色，并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染效率；对角膜虹膜和后囊膜行HE染色，观察病毒载体对晶状体上皮细胞和角膜虹膜组织的毒副作用。

结果：术后第1周就有EGFP表达，晶状体残留前囊膜及赤道部荧光染色较深，后囊中心部位荧光染色较淡。随着时间延长浓度增高表达增加，术后一月时转染效率达94%以上。各组在不同时间转染率的差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色显示，各组后囊膜、角膜及虹膜均无明显炎症反应与细胞坏死表现。角膜内皮镜结果显示角膜内皮细胞密度、细胞面积及变异系数各组对比差异无统计学意义(P>0.05）。

结论：rAAV2载体能安全有效的在体内转染晶状体上皮细胞，并有浓度和时间依赖性。而且对角膜虹膜及后囊膜等眼内组织无明显毒性作用，是基因治疗PCO的理想载体。