作者：陈玲 万飞
【关键词】 涎腺肿瘤；,视网膜母细胞瘤蛋白质；,免疫组织化学；,老年人
【摘要】 目的 探讨视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)、p16蛋白、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在涎腺腺样囊性癌（ACC）中的表达及相互关系。 方法 收集5个正常的唾液腺标本，27例≥60岁ACC患者标本，应用SP免疫组化方法观察RB通路中pRB、p16蛋白和cyclinD1的表达，增殖细胞核抗原（PCNA）用于细胞增殖的评价。 结果 pRB在正常唾液腺和ACC中表达是一致的。在4例（4/27，148%）观察到p16蛋白无表达。6例（222%，6/27）病例中观察到cyclinD1的过度表达，其中4例p16蛋白无表达，以实性ACC为主。 结论 涎腺ACC中p16蛋白缺失,cyclinD1的过度表达与ACC的肿瘤细胞高度增殖、肿瘤高恶性度及病人预后有关。
Study on the RB Pathway p16pRBcyclinD1 in adenoid cystic carcinoma of salivary glands CHEN Ling, WAN Fei. Department of Oral Pathology, Affiliated Jiangsu Oral Hospital， Naijing Medical University, Nanjing 210029 China
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To explore the expression of pRB, p16, cyclinD1 protein and its significance to adenoid cystic carcinoma of salivary glands(ACC). Ｍｅｔｈｏｄｓ Immunohistochemical staining was performed in 5 specimens of normal salivary glands and 27 cases(≥60 years old) of ACC. The RB Pathway(pRBp16INK4AcyclinD1)in ACC was observed. Proliferating cell nuclear antigen(PCNA) labelling index was used for the evaluation of cell proliferation. Ｒｅｓｕｌｔｓ The level of expression of pRB was found to be the same both in nomal salivary glands and ACC. p16 was negative in 4 of 27 cases of ACC. p16 was negative in 4 of the 6 cases of ACC which overexpressed cyclinD1, and the 4 cases of ACC showed solid type. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ p16 is absent in ACC, and the over expression of cyclinD1 correlates to the cell proliferation of ACC, malignancy of tumor and poor prognosis.
【Subject ｗｏｒｄｓ】 Salivary gland neoplasms; Retinoblastoma protein; Immunohistochemistry; Aged
涎腺腺样囊性癌(ACC)是涎腺恶性肿瘤中最常见恶性肿瘤之一，严重危害人的生命，多发于中老年患者。对头颈部肿瘤p16蛋白、视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)(p16pRBcyclinD1通路，RB通路)的研究主要集中在口腔鳞形细胞癌(SCC)上，其作用和意义已被证实[1]。但对涎腺ACC的RB通路的研究较少，未见≥60岁患者涎腺ACC研究报道。RB通路在涎腺ACC中的作用机制不很清楚。本文研究的目的通过分析涎腺ACC RB通路中的基因蛋白表达、PCNA的标记增殖肿瘤细胞，探讨RB通路在≥60岁患者涎腺ACC中的临床病理意义。
1 材料和方法
11 临床病理资料 27例来自南京大学医学院附属口腔医学院南京市口腔医院病理科2002年1月至2004年12月间常规活检手术标本。其中男17例，女10例，年龄60～71岁，平均（637±02）岁。27例标本组织学检查被诊断为原发，有足够的可选择的临床病理学数据，术前没有进行放疗或化疗(见表1)。常规HE染色, 由高年资病理医师2名采用双盲法光镜下对标本进行形态上病理诊断和分类。肿瘤按照Szanto[2]分组方法被分成3组：第1组为分化良好的没有实性型组成的管状型和筛状型(7例，7/27)；第2组完全为筛状型或混合不到30%实性型(13例，13/27)；第3组为以实性型占优势(7例，7/27)。
12 方法 采用免疫组化SP法，一抗为鼠抗人单克隆抗体和SP免疫组化试剂盒(PV600PicTureTMKits，Zymed公司)均购自北京中山生物技术有限公司。一抗稀释浓度p16(1∶40)，cyclinD1(1∶80)，pRB(1∶80)。乳腺癌阳性切片作阳性对照，PBS液代替一抗作阴性对照。所有实验和对照标本均常规10%中性甲醛溶液固定,梯度乙醇脱水，二甲苯透明和石蜡包埋,切片厚4～5 μm。微波炉枸橼酸盐缓冲抗原修复。
判定标准:参照Friedrichs标准，以细胞核出现棕色颗粒定为阳性，至少观察10个视野加以计数。“-”为阳性细胞≤5%，“+”为5%～50%阳性细胞，“++”为阳性细胞＞50%。PCNA阳性细胞用百分比计算。即用一切片中，100倍显微镜下，分析各部1 000个细胞核中PCNA阳性细胞所占比例。 免疫组化分析均采用捷达801病理、形态图像分析系统(由江苏捷达科技公司提供)。
13 统计学处理 采用ANOVA(analysis of variance)检验。
2 结果
21 正常涎腺组织 pRB主要在导管上皮细胞胞核和肌上皮细胞胞核表达，p16在导管上皮细胞胞核和胞浆及肌上皮细胞胞核和胞浆均表达，腺泡细胞均无表达。5例正常涎腺组织p16和pRB均表达，而cyclinD1蛋白无表达。
22 ACC中pRB、p16蛋白和cyclinD1的异常表达 在肿瘤细胞中pRB均在核表达(见封四图1)，在27例ACC中23例（23/27，851%）观察到p16蛋白表达(见封四图2)，无表达4例（4/27，148%）病例中观察到cyclinD1的过度表达，而且都是以实性腺样囊性癌为主。6例(6/27，222%)cyclinD1的过度表达(见封四图3)，主要以实性腺样囊性癌为主。p16缺失的肿瘤［PI=(242±21)%］细胞增殖明显高于p16阳性的肿瘤患者［PI=(104±35)%］(P＜005)，cyclinD1表达也与细胞增殖有关［cyclinD1无表达PI=(101±3)%，cyclinD1表达PI=(226±34)%］(P＜005)(见表1)。
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