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2 结 果
光学显微镜下观察，细胞胞核中出现棕黄色颗粒为TUNEL染色阳性凋亡细胞。凋亡细胞出现在视网膜内核层(INL)及神经节细胞层(GCL),而外核层(ONL)几乎无阳性表达。正常组未见凋亡细胞，对照组缺血再灌注1 h后仅可见少量凋亡细胞,再灌注后6 h凋亡现象逐渐明显，12 h凋亡细胞数逐渐增多,并于24 h达到高峰,48 h开始下降。实验组再灌注各时间点视网膜神经节细胞凋亡数目较对照组均明显减少(t=2.57～6.25,P＜0.01)。见表１。正常大鼠视网膜Bax蛋白不表达，Bax蛋白在对照组缺血再灌注1 h有极少量表达，6 h组表达略明显,主要位于GCL,在12 h组表达增强，在24 h组达高峰,以GCL、INL染色最为明显，在48 h组Bax蛋白表达下降。实验组Bax蛋白在各时间点的表达较对照组均减少(t=3.84～11.97,P＜0.01)。见表２。表1 两组缺血再灌注不同时间点同侧眼神经节细胞凋亡数目比较表2 两组缺血再灌注不同时间点Bax蛋白表达比较
3 讨 论
视网膜作为神经组织,在缺血低氧环境中极易受损伤,同时，由于视网膜中央动脉是终末动脉,故极易发生缺血,并可迅速导致视网膜的严重损伤。所以，缺血性视网膜损伤在眼科疾病中很常见，原因包括视网膜血管阻塞性疾病、高眼压以及影响视网膜血流量的眼科手术等。视网膜组织在缺血时已发生了功能受损,但恢复血流灌注后并不能使功能障碍减轻,反而加重了组织损伤，具体表现为许多缺血性眼病病人在血液再通后，视网膜损伤更严重，视功能进一步下降。由于能造成永久失明等严重后果,视网膜缺血再灌注损伤已经成为近年来引起广泛关注的眼科课题。在视网膜缺血再灌注损伤中，细胞凋亡是INL和GCL细胞死亡的主要方式。大鼠视网膜缺血再灌注后GCL损伤的主要机制可能与Bax的表达失衡有关。
本实验通过线栓法制备大鼠视网膜RIRI模型，在模型制备后，通过对其视网膜形态学上的观察，我们认为该方法制备视网膜RIRI模型行之有效。该方法的特点是：对动物创伤小，手术操作方便，动物存活率高。更为重要的是，和目前最为常用的前房灌注加压法相比，该方法使视网膜免于遭受机械性的压力损伤，其形态学上的变化更有利于我们进行临床研究。但线栓的直径和插入的长度有待进一步的探索，从而不断得到完善。
Bax蛋白存在于神经节细胞的胞浆,是一种促凋亡基因。在凋亡诱发因素的刺激下,位于细胞质或松散定位于线粒体膜上的Bax可能通过插入线粒体膜,诱导线粒体蛋白的释放,促进凋亡。
NRG是一种由4种基因编码组成的多肽家族，由NRG1基因编码产物经选择性剪接后形成，其中共包括4种异构体——NRG1、NRG2、NRG3、NRG4。NRG1β被认为与神经元的生存和功能有关，DIMAYUGA等[5]研究显示,无论在离体细胞培养还是在体动物模型上,NRG1β对中枢神经系统都具有抗炎作用,从而提示NRG1β可能对缺血性脑损伤具有神经保护作用。缺血诱导的脑损伤和NRG1β的神经保护作用可通过TUNEL染色结果进行评价，大鼠脑缺血再灌注24 h后，在缺血皮质和皮质下区域内的细胞核中可发现强烈的TUNEL染色。而在大鼠脑缺血再灌注前静脉注射NRG1β，能够使皮质缺血半暗带内的TUNEL染色减弱。
细胞凋亡的特点是核小体间被活化的核酸内切酶切断，而TUNEL法能使凋亡细胞特异地与断裂DNA的3OH末端结合,并被显示出来,可在组织切片上检出未发生形态改变的早期凋亡细胞,并进行原位定量、定性分析。
本研究结果显示，凋亡细胞参与了视网膜缺血再灌注损伤发生，在RIRI过程中视网膜GCL存在着明显的凋亡现象，并以缺血再灌注 24 h组最为显著，而这与国内报道的结果也是吻合的[6]。NRG1β处理各时间点视网膜凋亡细胞数目与对照组相比明显减少，差异有统计学意义；实验组各时间点Bax蛋白的表达较对照组均明显下降，差异有统计学意义。说明NRG1β能明显减轻视网膜缺血再灌注引起的视网膜细胞的凋亡，具有明显的视网膜保护作用；而抑制Bax的表达，可能是NRG1β抑制细胞凋亡的机制之一。但NRG1β在视网膜RIRI中发挥保护作用的具体机制有待于作进一步的研究。
【参考文献】
[1]王景,孟瑞华,尹晓涛,等. 建立猴脑缺血再灌注模型对其视网膜影响[J]. 眼科新进展, 2008,28(4):270273.
[2]游志鹏,陈珊,赵菊莲,等. TNFα在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及NAC对其表达的影响[J]. 眼科新进展, 2006,26(5):351353.
[3]尹晓涛,孟瑞华,王景. 线栓法制备大鼠视网膜缺血再灌注模型的初步探讨[J]. 青岛大学医学院学报, 2008,44(4):357360.
[4]周晓彬,纪新强,徐莉. 医用统计学软件PPMS 1.5的组成和应用特点[J]. 齐鲁医学杂志, 2009,24(1):2932.
[5]DIMAYUGA F O, DING Q, KELLER J N, et al. The neuregulin GGF2 attenuates free radical release from activated microglial cells [J]. J Neuroimmunol, 2003,136(1):6774.
[6]李国栋,袁援生,游志鹏,等. 大鼠视网膜缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的变化[J]. 昆明医学院学报, 2006,27(2):7173. 上一页 [1] [2] |
