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EPO组缺血再灌注后第1天神经纤维层和RGC层水肿，个别RGC体积变大、胞浆染色变淡(图2A)。第3天仍可见到水肿改变，但明显减轻，少数RGC出现细胞核固缩、坏死(图2B)。第7天水肿消失，视网膜组织变薄，少部分RGC消失(图2C)。第14天多数RGC存活，视网膜明显较模型组厚(图2D)。
2.2 IRL厚度测量
IRL厚度测量结果见表1。从表中可知，模型组IRL厚度在再灌注后第1天有所增厚，但和对照组比较无显著性差异(P>0.05)。第3天IRL厚度比对照组薄(P<0.01)。第7、14天模型组IRL厚度均比对照组变薄(P<0.01)。表1 再灌注后不同时间的IRL厚度（略）
EPO组IRL厚度在再灌注后第1天有所增厚，但和对照组比较无显著性差异(P>0.05)。第3天IRL厚度比对照组薄(P<0.05)。第7、14天EPO组IRL厚度均比对照组变薄(P<0.01)。
EPO组IRL厚度在再灌注后第3、7、14天均比模型组IRL厚度增厚，其差异有显著性(P<0.05，P<0.01)。
2.3 视网膜RGC计数
RGC计数结果见表2。模型组RGC计数在再灌注后第1天开始减少，但和对照组比较差异无显著性(P>0.05)。第3、7、14天继续逐渐减少，和对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。表2 再灌注后不同时间的线形RGC计数（略）
EPO组RGC计数在再灌注第1天开始减少，但和对照组比较差异无显著性(P>0.05)。随着时间的延长，RGC计数继续逐渐减少，和同时间点对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
EPO组RGC计数在再灌注的第1、3天多于模型组，但两组比较差异无显著性(P>0.05)。第7、14天仍均比模型组多，其差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
许多青光眼患者在眼压得到良好控制的情况下仍然会发生视力下降及视野缺损的加重，因此视神经保护在青光眼防治中非常重要。视网膜和视神经的缺血缺氧、兴奋性氨基酸和氧自由基等毒性产物的增多，均是引起视功能损害的因素。寻找新的神经保护药物一直是青光眼研究的重要课题。
近年来的研究表明EPO可能成为一种新的神经保护剂[13]。人类EPO(包括rhEPO)含有165个氨基酸，分子质量为34.4ku，其中60%是蛋白质(单个多肽链)，40%为糖类，有3个N端糖链和1个O端糖链，并有2个双硫键连接。EPO及其受体广泛分布于人类多种组织中，亦存在于胎儿脑组织的整个发育过程中，并在成人脑中仍然存在。EPO通过促进红细胞生存、增殖及分化来调节红细胞生成。临床上主要用于各种贫血的治疗。EPO对视网膜的神经保护研究已经展开。有研究表明当培养的神经元或者神经干细胞缺氧时加入超生理浓度的EPO(5u/mL)可以保护神经元免受损伤[6]。对培养的海马及大脑皮层神经元预先给予生理浓度的重组EPO处理8h或更久可以预防N甲基D天冬氨酸为中介的谷氨酸导致的神经坏死[7]。
EPO对视网膜神经组织保护作用方面的体内研究较少，但结果都显示了EPO的神经保护作用。在早期糖尿病大鼠模型中，使用外源性的EPO能改善早期糖尿病大鼠的视网膜EPO受体的上调并延缓视网膜神经细胞的结构损伤[8]。rhEPO可通过小鼠的血视网膜屏障，对视网膜光损伤起到保护作用[9]。玻璃体腔内注射rhEPO也有助于防止视网膜缺血再灌注后视网膜神经节细胞的凋亡[10]。我们既往的研究结果证明，皮下注射rhEPO可以缓解急性高眼压对兔眼视网膜电图的损害，保护视网膜的神经功能[3]。
本研究从活体组织结构上进一步探讨了rhEPO对缺血再灌注损伤视网膜的保护作用。从再灌注后第3天开始，模型组视网膜IRL较对照组变薄、RGC较对照组减少，说明缺血再灌注引起了视网膜组织损害。EPO组IRL厚度在再灌注后第3、7、14天均比模型组IRL厚度增厚，说明皮下注射rhEPO可以减轻急性高眼压引起的IRL厚度变薄程度。EPO组再灌注后第7、14天的RGC数量比模型组多，说明缺血再灌注引起RGC数量的减少，但皮下注射rhEPO可以减轻RGC数量减少程度。研究结果表明皮下注射rhEPO能够减轻缺血再灌注后视网膜组织水肿、预防视网膜的萎缩变薄、减少RGC的丢失，起到保护视网膜结构的作用。
EPO的神经保护机制复杂，尚不完全清楚。rhEPO预处理可减弱高眼压对视网膜造成的损伤，减少和延缓细胞凋亡的发生，其可能的机制是通过激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号传导通路上调pAkt来抑制凋亡的发生[2]。EPO能够刺激红细胞增生，增加红细胞数量，增加视网膜和视神经的氧的供给，这也有利于神经保护。EPO也可通过与其受体的结合，直接起到保护神经的作用[2,8]。通过上调Bcl2表达抑制RGC凋亡也可能是其神经保护机制之一[6]。总之，rhEPO有望用于视网膜的神经损害治疗，其神经保护作用的多种机制及之间的交互联系等仍有待于进一步深入研究。
【参考文献】
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[10]梁淑欣，谢汉平，曾玉晓，等. 重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用 [J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(17):17751777. 上一页 [1] [2] |
