|
2结果
正常条件下在大鼠视网膜cfos有少量的表达,缺血可诱导cfos mRNA的表达,缺血0.25h后cfos mRNA的表达水平即开始增加,在1h左右达到最高,然后逐渐减少,12h后恢复到正常水平（图1）。
3讨论
cfos是一种癌基因，包括神经元在内的绝大多数正常细胞中有低水平的表达，其表达产物是细胞核的磷酸蛋白(Fos蛋白)，后者形成DNA结合蛋白复合物并通过选择性的启动子刺激转录。蛋白质的功能由其本身的结构决定，大量研究结果已揭示了cFos蛋白功能与结构的密切关系。原癌基因cfos编码产物（cFos蛋白）为一个含有380氨基酸残基的蛋白质，病毒癌基因vfos编码产物vFos蛋白含有381个残基，与cFos前332个残基几乎相同，而C端差异很大。Fos蛋白有3个主要的功能区：（1）碱性DNA结合区，位于139～159残基处，包含12个碱性残基，是Fos蛋白的正电荷中心；（2）与DNA结合区紧邻的亮氨酸拉链区（Leucine Zipper Domain），位于165～193残基处；（3）C端转录调节区，位于332～380残基处。细胞在受到各种刺激后cfos迅速表达，表达产物维持时间短暂，故称早期快反应基因(immediate early genes，IEGS)。故我们在以往实验的基础上观察视网膜缺血0.25h后cfos基因的表达情况。许多研究证明脑缺血可诱导cfos基因在脑内的表达［2，3］。视网膜是中枢神经系统的外延部分，故从理论上讲视网膜缺血应该能够诱导cfos基因在视网膜内表达，本实验的结果验证了这一推论。视网膜缺血0.25h后其内核层即出现fos表达，缺血2h后达高峰，此结果与脑缺血的研究结果相吻合［4］。视网膜节细胞层在缺血0.5h后也出现fos表达，在缺血2h达高峰。Otori等采用结扎视网膜中央动脉的方法［5］，用免疫组化及原位杂交的方法检测缺血视网膜内cfos，cjun基因的表达情况。原位杂交结果显示cfos，cjun基因均有表达，而免疫组化方法只观察到Jun的表达，Fos免疫组化为阴性，其原因可能与cfos的激活机制有关。脑缺血的研究也有类似的报道［24］。cfos基因的表达因刺激手段，实验模型和实验方法不同而不同。目前认为即早基因(IEG)在多种细胞均能被诱导，但受细胞表型的限制，同一种刺激能引起不同表型的细胞表达不同量的IEG，许多刺激均可诱导IEG表达，但有相对的特异性［4］。在整体动物实验如颠痫模型和伤害性刺激IEG似乎能得到更广泛的表达，但目前的研究主要集中在对fos家族和jun家族的研究。大量的研究认为cfos，cjun等基因的表达是一过性的，但目前也有不少研究发现cfos，cjun的表达常会延迟出现，并可持续数周或数月［5，6］，故推测即早基因表达可能有几种模式快速一过性表达、延迟的一过性表达及持续的组织特异性表达［7］。我们未进行缺血诱导cjun的实验，但从本实验缺血视网膜cfos表达情况分析，本实验模型所诱导的cfos表达属快速一过性表达。不同的表达模式及其相应的机制和意义仍需做进一步探讨。
【参考文献】
1郭瑶，陈蕾，王敏芳，等.孟加拉玫瑰红诱导的激光所致大鼠缺血性视神经病变模型制作.国际眼科杂志 2007；7（3）：703706
2 Mittag T, Schmidt KG. Mechanisms of neuroprotection against glaucoma. Ophthalmologe 2004；101（11）:10761086
3 Quigley HA, Nickells RW, Kerrigan LA, et al. Retinal ganglion cell death in experimental glaucoma and after axotomy occurs by apoptosis. Invest Ophthalmol Vis Sci 1995；36:774 786
4 Nickells RW. Retinal ganglion cell death in glaucoma: the how, the why, and the maybe. J Glaucoma 1996；5(5):345356
5 Iwata K, Tsuboi Y, Shima A, et al. Central neuronal changes after nerve injury: neuroplastic influences of injury and aging. J Orofac Pain 2004；18(4):293298
6 Oshitari T, Dezawa M, Okada S, et al. The role of cfos in cell death and regeneration of retinal ganglion cells. Invest Ophthalmol Vis Sci 2002；43:24422449
7周历,张康兰,方以群,等.缺血再灌损伤对视网膜结构和功能的影响,中华眼科杂志 1998；34(2):134136
上一页 [1] [2] |
