陈鹏   银红梅   王瑶   何文晓   王宜强

山东省眼科研究所   266071

目的：应用碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管模型，探讨联合应用针对VEGF、Endostatin和Ang等三个靶点的抗新生血管基因治疗措施。

方法：在PT67细胞中包装编码mEndostatin、msFlk-1 和 msTie2的逆转录病毒载体。通过RT-PCR检测稳定转染的PT67细胞内相应基因的表达。通过感染NIH3T3细胞检测病毒滴度。采用MTT法检测mEndostatin、msFlk-1和msTie2对HUVEC细胞的增殖活性的影响；应用划痕法检测对HUVEC细胞迁移能力的影响。70只C57Bl/6 小鼠用于角膜新生血管的抑制实验，采取碱烧伤的方法诱导小鼠角膜新生血管的动物模型，通过注射的方法将不同组合的病毒颗粒注入球结膜下，观察其抑制角膜新生血管的效果。

结果：成功包装出表达mEndostatin、msFlk-1 和 msTie2的逆转录病毒。体外实验表明，mEndostatin、msFlk-1 和 msTie2 单独或者联合应用均可抑制HUVEC细胞的增殖和迁移。在碱烧伤的诱导的小鼠角膜新生血管的动物模型中，通过结膜下注射重组病毒颗粒发现，mEndostatin 和msFlk-1联合应用可以最大限度地阻止新生血管的发生和发展。

结论：在碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管模型中，通过结膜下注射联合应用针对VEGF和Endostatin靶点的抗新生血管治疗措施能最有效抑制角膜新生血管的发生发展。