姜廷帅   蔡莉   惠延年   王雨生   戢维颖

西京医院眼科   710032

目的：探讨骨髓间充质干细胞作为眼表组织工程中的种子细胞的可行性；以羊膜为载体，制成角膜上皮片，进行碱烧伤动物模型活体移植，观察其移植后疗效。

方法：密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化大鼠MSC，体外与角膜基质细胞共培养诱导分化，扫描电镜、细胞表面角蛋白鉴定。制备角膜碱烧伤大鼠模型，36只大鼠分对照组，单纯羊膜移植组，角膜上皮片移植组。术后不同时间点裂隙灯观察角膜变化；对术后4w、10w大鼠角膜评分并进行统计学分析。

结果：体外：大鼠骨髓间充质干细胞CD29免疫荧光染色阳性，CD34、CD44为阴性，符合MSC特征。角膜基质细胞诱导7d后的MSC经免疫细胞化学及扫描电镜检测符合角膜上皮细胞特性。体内：对术后4w、10w大鼠角膜评分，统计学分析表明3组荧光素钠着染面积、角膜混浊程度、新生血管面积差异有显著性差异（P<0.05），角膜上皮片移植组评分优于单纯羊膜移植组和对照组。HE显示羊膜组与对照组均有上皮覆盖现象，免疫组织化学染色CK13阳性、CK12阴性；角膜上皮片移植组的角膜上皮抗体CK12表达阳性，说明角膜上皮片移植组大鼠的角膜已恢复正常角膜上皮结构；角膜共焦激光显微镜结果与上述结果相符。

结论：大鼠MSC在体外采用角膜基质细胞诱导，可以成功分化为角膜上皮细胞；羊膜与诱导分化后的MSC一起构建的角膜上皮片可成功移植在角膜碱烧伤大鼠眼表面并重建眼表。