卢芝浩 支晔

　　汕头大学·香港中文大学联合汕头国际眼科中心 515041

　　目的：探讨大鼠视网膜体外培养技术关键及影响视网膜节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)存活和轴突再生的主要因素。

　　方法：现以F344大鼠为例，将大鼠断颈处死后，立即取下眼球，经70%酒精消毒、PBS冲洗后，置于HBSS内;沿角巩缘环形切开角膜，用显微镊将玻璃体剥离干净后，用无损伤镊剥离视网膜，将视网膜剪成十字形，裱于消毒好的Whatman纤维素滤纸(2cmX2cm)上，然后放在滤纸上将水吸干，置于24孔培养板中。每孔加入2ml的Neurobasal培养基(含B27.谷氨酰胺)，在37℃、5%的CO2培养箱中培养，隔三天换一次液。视网膜在Whatman纤维素滤纸上生长良好。培养后，经4%多聚甲醛固定，TUJ1免疫组化染色，观察视网膜内存活的RGCs和再生的轴突。

　　结果：与

　　结论：视网膜体外培养是一种组织培养方法，常用于进行视网膜神经节细胞的存活及其轴突再生的相关研究，而操作中的关键技术直接影响RGCs的存活与轴突再生。本方法操作过程中应注意以下几方面：1.将玻璃体剥离干净，否则会影响RGCs的存活;2.选用无损伤镊避免镊子对视网膜的夹压，视网膜剥离后应完整;3.将视网膜平铺到Whatman纤维素滤纸后，用滤纸将水吸干使视网膜牢固吸附在Whatman纤维素滤纸上，直至培养结束，以视网膜不脱落为佳。