张红梅 吴星伟 顾青

　　上海市第一人民医院 200080

　　目的：探讨过氧化氢(H2O2)对视网膜外屏障的破坏及促红细胞生成素(EPO)对其保护作用。

　　方法：MTS法检测H2O2，EPO，H2O2+EPO对视网膜色素上皮(RPE)细胞活力的影响。transwell试验及跨上皮细胞电阻(TER)检测H2O2组，EPO组，H2O2+EPO组对RPE通透性的影响。透射电镜观察细胞之间紧密连接形态。免疫荧光法检测RPE之间紧密连接蛋白ZO-1，Occludin及相关蛋白F-肌动蛋白的表达情况，RT-PCR及Western Blot在mRNA及蛋白水平检测这些紧密连接蛋白的表达变化。

　　结果：H2O2对RPE有毒性作用且有剂量相关性，<0.5mMH2O2对细胞活力的影响不明显。EPO对RPE细胞活力有保护作用，1U EPO的保护最明显。RPE细胞接种于Transwell后，TER值3周达到最高值约88.19 欧姆cm2，维持一周后开始下降。透射电镜可见细胞表面的微绒毛及细胞间形成紧密连接。免疫荧光可见H2O2组细胞之间紧密连接蛋白表达减少，细胞框架勾勒不连续。EPO组细胞呈多边形，细胞框架勾勒完整。RT-PCR及Western Blot的结果均表明在mRNA及蛋白水平H2O2组紧密连接表达减少，EPO组比H2O2组紧密连接表达增加。

　　结论：过氧化氢对视网膜外屏障有破坏作用，促红细胞生成素对其有一定的保护作用。