陈震
武汉大学人民医院眼科 430061
目的:探讨表皮生长因子(EGF)对人视网膜色素上皮细胞(hRPE)表达整合素α5的影响及意义。
方法:不同浓度的EGF条件下hRPE培养,RT-PCR及流式细胞术观察不同实验组整合素α5mRNA和蛋白的表达;将实验分为4组:①对照组 DMEM/F12,②DMEM/F12+10ng/ml EGF,③DMEM/F12+10ng/ml EGF+兔抗人整合素α5多克隆抗体(1∶100),④DMEM/F12+10ng/ml EGF+不相关抗体(兔抗人波形蛋白抗体,1∶100),用MTT和Boyden小室法检测细胞增生及迁移。
结果:与对照组相比,24h后1ng/ml的EGF促进hRPE细胞中整合素α5mRNA和蛋白的表达,并呈浓度依赖性,而浓度为10~100ng/ml时促进作用达到高峰。RT-PCR见:以整合素α5/β-actin数值,10ng/ml EGF组为2.04±0.15,明显较对照组(0.56±0.05)高(P<0.01);流式细胞术检测显示:10ng/ml EGF作用时荧光强度最强为3.98±0.67;对照组和0.1ng/ml组分别为1.34±0.22,2.31±0.54(P<0.01)。MTT法检测显示:与①组相比,②及④组细胞增生明显,而③组较弱,与前两组相比差异有显著性(P<0.01)。而整合素α5的表达对hRPE细胞迁移的影响与增生相同。
结论:1ng/ml的EGF开始促进整合素α5mRNA和蛋白的表达,10~100ng/ml时候促进作用达到高峰,整合素α5的表达促进hRPE细胞的增殖和粘附,提示EGF诱导hRPE细胞表达整合素α5可能在增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)中起重要作用。 |