自体角膜缘移植术治疗角膜缘缺陷症的实验与临床研究
眼科新进展 1999年第4期第19卷 研究原著
作者：陈　剑　徐锦堂　李　辰　郑阿宁
单位：510632　广东省广州市，暨南大学医学院附一院眼科
关键词：角膜缘移植；角膜缘缺陷症；兔

　　摘要　目的　探讨自体角膜缘移植术在局限性或全角膜缘缺陷症治疗中的作用。方法　动物实验以兔眼前节碱烧伤制作全角膜缘缺陷症模型，烧伤后实施自体角膜缘移植术治疗。结果　动物手术组角膜上皮愈合快，角膜新生血管及炎细胞浸润均轻于对照组。临床研究中所有翼状胬肉均未见复发。结论　自体角膜缘移植术治疗角膜缘缺陷症效果显著，是一种符合生理机制的、安全的手术方式。
Experimental and clinical study on the effects of
　　limbal autograft transplantation on limbal deficiencies
　　CHEN Jian,XU Jin-Tang,LI Chen,ZHENG A-Ning
　　Key words　corneal limbal transplantation;corneal limbal deficincy;rabbit
　　Abstract　Objective　To understand the effects of limbal autograft transplantation on local or whole limbal deficiencies.Methods　In animal experiments,the whole limbal deficiencies on the anterior segments of the rabbit eyes were made.Limbal autograft transplantation was performed on these eyes.In clinical studies,this surgical procedure was performed on the eyes suffered from pterigiums.Results　Faster corneal epithelial healing,less corneal neovascularization and inflammatory cell infiltration occurred in the animal operative group.No recurrences occurred in clinical pterigium cases.Conclutions　Limbal autograft transplantation has good effects on limbal deficiencies.This procedure is physiological and safe.

　　生理性角膜上皮完整对角膜的正常代谢和功能维持具有重要意义。累及角膜缘部的角膜上皮病变(角膜缘缺陷症)病情顽固，难以治愈。本文根据角膜缘干细胞理论，通过动物实验及临床应用观察自体角膜缘移植术在角膜缘缺陷症治疗中的作用，现报告如下。

　　1　材料和方法

　　1.1　角膜缘缺陷症动物模型制作与临床患者选择
　　1.1.1　动物模型　取健康新西兰兔14只，雌雄兼有。体重2.0～2.5kg。30g·L-1戊巴比妥1mL．kg-1全身麻醉。10g．L-1丁卡因右眼表面麻醉。将内径14mm、外径20mm的环形及直径14mm圆形3层镜头纸置于1.0mol．L-1的NaOH溶液中，达到饱和状态后以干滤纸将其边缘多余的碱溶液吸除，以角膜顶点为中心置于右眼前节表面，1min后取下纸环与纸片，用生理盐水冲洗结膜襄。
　　1.1.2　患者选择　翼状胬肉患者10例12眼，胬肉头部均进入角膜缘内大于3mm。年龄32～75a。原发者9例11眼；复发者1例1眼。静止期10眼，活动期2眼。

　　1.2　角膜缘移植术

　　1.2.1　动物实验　随机取上述7只实验兔于烧伤后当日行自体角膜缘移植术，即取材对侧健眼上、下方各一块角膜缘组织移植于烧伤眼角膜缘相应部位，另7只眼作对照。
　　1.2.2　临床应用　翼状胬肉患者采取患眼上方或颞上方健康角膜缘组织片移植于胬肉切除后的病变角膜缘区。
　　1.3　临床观察
　　1.3.1　动物实验　每日用手持裂隙灯放大镜观察2组烧伤眼眼前节变化。2.5g．L-1荧光素染色观察角膜上皮修复情况。观察1mo，详细记录并照像。
　　1.3.2　临床对象　术后每日观察术区及角膜情况至2wk末，随访3～4mo。
　　1.4　实验动物组织病理学观察　于烧伤后1mo处死实验兔，标本处理和制片后在光镜下观察角膜断面，TSM-T300型扫描电镜下观察角膜上皮并照像。

　　2　结果

　　2.1　动物实验

　　2.1.1　临床表现　手术组：供眼角膜缘炎症1wk内消失，缘部缺损区10～17d(平均12.70±2.43d)愈合。角膜在观察期内保持透明，未出现上皮缺损，受眼角膜上皮于7～12d(平均8.29±2.14d)全部愈合。2只眼角膜分别于烧伤后5、7d出现新生血管，伤后18、21d开始消退。烧伤后1mo角膜表面光滑；对照组：4只眼角膜上皮于19～27d(平均22.50±3.42d)愈合。3只眼分别于烧伤后7、13及15d发生角膜溃疡，其中1眼于烧伤后22d发生角膜穿孔。6只眼于烧伤后7～13d(平均10.50±2.51d)角膜发生新生血管；1mo时新生血管无消退现象。4只眼非溃疡愈合角膜表面覆有肥厚的角膜血管翳，且粗糙不平。

　　2.1.2　组织病理学改变　光镜下手术组受眼角膜上皮细胞排列较规则，厚薄较均匀，未见杯状细胞，基质浅层可见少量炎症细胞浸润，角膜板片排列较规则，偶可见基质浅层新生血管，血管内红细胞较少。供眼角膜断面未见异常改变。对照组角膜上皮细胞层次不一，基质内可见大量炎细胞浸润，基质水肿，角膜板片排列紊乱，可见较多新生血管，管腔内充满红细胞。扫描电镜观察，手术组受眼上皮细胞界限较清，表面微绒毛可见，细胞间镶嵌较紧密。对照组角膜上皮细胞水肿，细胞间连接不紧密，可见上皮细胞缺损区，大量纤维素样组织覆盖于角膜表面。溃疡面可见较多的炎症细胞。

　　2.2　临床对象

　　2.2.1　术后观察　1wk内，术区组织轻度炎性水肿，3～5d出现少许新生血管。新生上皮组织2wk内覆盖术区创面。

　　2.2.2　随访期间，翼状胬肉患者均未见复发，移植片全部存活，并融合于周围组织中。仅1例原病变区有轻度充血，角膜缘部少许增生组织，但未进入角膜区。供区角膜缘完全愈合，未出现并发症。

　　3　讨论

　　近年来，人们对角膜上皮创伤愈合机制作了大量研究，发现上皮愈合是通过细胞移行和增殖完成的。而角膜缘基底层存在的干细胞是上皮细胞增殖、分化的源泉［1］。多种角膜上皮病变是由于角膜缘干细胞丧失或功能障碍引起，表现为角膜缘缺陷症。Kenyon等［2］因此设计出自体角膜缘移植术，在治疗眼化学烧伤、接触镜引起的角膜上皮病变等角膜缘缺陷症患者中取得满意效果。本文通过碱烧伤制作的角膜缘缺陷症动物模型，以自体角膜缘移植术治疗。结果显示，对照组有85.7%出现角膜新生血管，手术组仅28.6%出现角膜新生血管，并分别于烧伤后18、21d开始逐渐消退。组织病理学观察与临床观察相符。翼状胬肉作为局限性角膜缘缺陷症，传统手术方法往往存在复发率高的缺点。本文以自体角膜缘移植术(翼状胬肉单纯切除术后)治疗该病症，10例12只眼随访期间均未出现复发。本手术成功的关键在于为病变的角膜缘组织提供了健康的干细胞。本研究结果也进一步证实了角膜缘干细胞理论。

　　自体角膜缘移植术取材方便、操作简单、安全，是一种符合生理机制的较理想的手术。
 
　　注释：本文曾在第一届世界华人眼科学术大会上交流

　　作者简介　陈　剑，男，1963年8月生，浙江温州人，汉族，中共党员。1994年毕业于暨南大学眼科学专业，获得医学博士学位。现任暨南大学医学院附一院眼科教研室主任，眼科副教授、副主任医师，暨南大学眼科专业硕士研究生指导教师。主要从事角膜病及眼化学烧伤研究，发表专业论文近20篇，科研成果获省政府科技进步奖。参与编写了《角膜病的基础理论与临床》一书。联系电话：(020)85516832-2116(办)。

　　参考文献

　　1　陈　剑(综述).角膜缘干细胞及其临床意义.国外医学眼科学分册 1992；16∶340-342.
　　2　Kenyon KR,Tseng SCG.Limbal autograft transplantation for ocular surface disorders.Ophthalmology 1989;96∶709-715.
收稿日期：1998-10-11；修回日期：1998-11-25