摘要　目的 研究大鼠角膜移植排斥反应发生 机理。方法 制作模型(Wistar 大鼠18只，豚鼠9只)。观察角膜透明度、新生血管。角膜和外周血行免疫检测。并对角膜进 行扫描电镜观察。结果 术后1周，植床出现新生血管、角膜水肿、基质增厚；术后1月， 植床瘢痕化，但水肿减轻。免疫组化显示：移植后3天，血中Th／i细胞IL-2R^＋细胞升高，15天时角膜植片内有以TC／S细胞浸润为主的淋巴细胞。结论 大鼠穿透性角 膜移植术后排斥反应有着与机体其它器官相似的移植排斥过程。

    The cl inical immunology study of cor neal penetrating xenograft in Wistar rats

Ding Wei　Wu Guijun　Chen Jiaqi

　　（Department of Ophthalmology，Nanfang Hospi tal，First Military Medical

　　University，Gu angzhou 510515）

　　Abstract ObjectiveTo in vestigate the rejection mechanisms of co rneal penetrating xenograft．MethodsTh e corneal penetrating xenograft models wer e made in 18 Wistar rats and9 guinea pi g s．The diameter of graft was 6.0mm，and diameter of receipt bed was 0.5 mm shorter than the graft．The graft was continuous sutured by nylon wire．Cornea l pellucidity，edema and neovascularizati on were observed by opton slit-lamp micr oscopy every 4d，and stopped till 30d a fter keratoplasty．Rejection value （RV） w as calculated according to Holland’s gra de．On 6，10d （one eyeball）and 15d（two e yeballs） after keratoplasty，immunohistoc hemical study was performed in the corne a．On 3d preoperation and 3，9，15，21，30d postoperation，1.5mm blood was gotten o ut from the rat’s hearts，and the change s of lymphocyte subgroup were observed．O n 12，20d after keratoplasty，the corneal constitution and form of the animals we re respectively observed and taken a pho tograph by scanning electron microscope． I mmunological study was performed in the cornea and the peripheral blood．Results In the first week of postoperation，neo va scularization，corneal edema and thicknes s of stroma occurred in recipient site．I n the first postoperative month，the reci pient site cicatrized and corneal edema lessened．Immunohistochemical studies sho wed that Th／i cells and IL-2 R^＋ cells w ere increased in the peripheral blood on 3d after keratoplasty，At 15d after ke ratoplasty，the major infiltrating cells were Tc／s cells in the graft corneas．Co nclusionThe rejection of corneal penet ra ting xenograft in rats may be similar to that of other organs．

　　Key words　cornea l penetrating xenograft immunological study

　　眼外伤和感染性角膜疾病均可导致角膜混浊，视力下降。目前，穿透性角膜移植仍公认为是治疗瘢痕性角膜混浊、恢复视力的唯一有效方法。但手术后排斥反应是威胁角膜移植片成活，导致手术失败的要素之一，异种穿透性角膜移植术后排斥反应更是如此。为探明异种穿透性角膜移植术后排斥反应的发生机理，我们设计用Wistar大鼠和豚鼠行异种穿透性角膜移植，观察其免疫学变化，以求探明大鼠异种穿透性角膜移植术后排斥反应的可能发生机理。

　　1　材料与方法

　　1．1　Wistar大鼠(2～3月龄，体重180～220g，雄性)18只，豚鼠(2～3月龄，体重200～230g，雌雄兼用)9只。

　　免疫组化主要试剂：小鼠抗大鼠T淋巴细胞亚群W／OX系列单克隆抗体，由军事医学科学院进口分装。显示系统：ABC试剂盒，为Dako公司产品。

　　1．2　大鼠异种穿透性角膜移植术(均为右眼，方法从略)

　　1．3　临床观察

　　根据Holland等^［6］建立的临床观察评分法，观察角膜混浊得分值RV（rejection value角膜混浊分值)，计分标准如下：

　　透明度：(0)清亮；(1)轻度混浊；(2)混浊加重，前房清楚可见；(3)混浊加重，前房模糊可见；(4)全混浊，前房看不见。

　　水肿：(0)无基质水肿或上皮水肿；(1)轻度基质增厚；(2)弥漫性基质水肿；(3)弥漫性基质水肿并上皮Microcytic水肿；(4)大疱性角膜病变。

　　新生血管：(0)无；(1)周边新生血管；(2)切口部新生血管；(3)植片新生血管；(4)全角膜新生血管。以Opton裂隙灯显微镜观察，每隔3天计分1次，动态观察30天。

　　1．4　免疫病理观察

　　角膜免疫组化：角膜移植术后第6，10天各取1只，第15天取2只鼠角膜移植眼球做冰冻切片及免疫组化。

　　外周淋巴细胞亚群动态分析：术前3天，术后3，9，15，21，30天，心内穿刺取血1.5ml，观察淋巴细胞亚群的变化。

　　1．5　扫描电镜：角膜移植术后第12，20天各取1只角膜。扫描电镜下，观察植片和植床组织细胞的结构及形态变化，摄影。

　　2　结果

　　2．1　临床观察

　　根据Holland计分法，观察排斥反应程度的动态曲线(见图1)，术后1周，植床出现新生血管，角膜混浊加重，基质增厚水肿，15天RV接近峰值。1月时，植片进入瘢痕化，植床水肿减轻，一个半月时植片瘢痕化、收缩，植床水肿消退。而自体角膜移植术后角膜一过性水肿，1周后角膜植片透明。

　　 图1　角膜移植后排斥反应程度的变化

　　Fig．1　The changes of reject ion value after corneal graft

　　2．2　移植前后血中淋巴细胞亚群的变化

　　角膜移植前后外周血T细胞亚群的动态观察见表1。

表1　角膜 移植前后外周血T细胞亚群的动态观察(±s)

　　Tab．1　Changes of the T cells in per ipheral blood before corneal graft(±s)

　　由表中可见：术后3天，Th／i、IL-2R^＋细胞百分率开始明显升高，术后9天，Th／i略有降低，IL-2R^＋细胞变化不大，Tc／s明显升高。

　　2．3　术后角膜植片淋巴细胞亚群观察

　　从角膜免疫组化可观察到，术后6天，植片中出现Ia^＋细胞浸润。术后10天，植片淋巴细胞浸润加重，尤以缝线处为甚，见Ia^＋细胞增多。术后15天，植片有大量的淋巴细胞浸润，Tc／s阳性细胞较多，Th／i，IL-2R、Ia均有表达。

　　2．4　扫描电镜观察

　　术后12天，植片切口内及周围见淋巴细胞浸润，以T淋巴细胞、巨噬细胞多见，植片内皮细胞间隙扩大，微绒毛减少。术后20天，植片内皮排斥，细胞膜破裂、坏死。

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