摘要　目的 探讨FasL及pRb在视 网膜母细胞瘤中的表达及意义。方法 用免疫组织化学SP方法检测45例视网膜母细胞瘤及 12例 正常视网膜组织中FasL及pRb蛋白的表达。结果 视网膜母细胞瘤组织表达pRb ，比正常组织显著降低(P＝0.0009)。视网膜母细胞瘤和正常组织均高表达FasL。结论 FasL的表达是贯穿视网膜母细胞瘤发生及发展过程中的一个重要事件，pRb低表达与肿瘤的发生有密切关系。

A study on the expre ssion of FasL and pRb in retinoblastoma

Kong Lingfei　Liu Zhengguo　YinPing　zhangHenan

　　（Provincial Hospital，Zhengzhou 4 50003）

　　Abstract ObjectiveTo investigate the significance of FasL and pRb express ion in retinoblastoma．MethodsAll mater i als were archival formalin-fixed and par affin-embedded samples．Both FasL and pRb in 45 cases of retinoblastoma and 12 ca ses of normal retina were investigated．T he biotinylated second antibody and enz yme conjugated immunohistochemical stain ing technique was used．ResultsThe expr e ssion of pRb in retinoblastoma and norma l retina were 1.778±0.876 and 2.833±1.115，respec tively(P＝0.0009)，immunostaining for pRb i n normal retina were significantly highe r than that in the retinoblastoma．The ex pression of FasL in retinoblastoma and n ormal retina were 3.021±0.847 and 3.583±0.669，re spectively（P＝0.023)．Normal retina tissue stained very strongly positive for FasL and the retinoblastoma stained slightly weaker than the normal retina tissue，ex hibiting FasL was high-regulation in nor mal retina and retinoblastoma．Conclusio n High-regulation of expression of FasL i n retinoblastoma and normal retina sugge sted that it is a throughout event which implicated a novel mechanism immune esc ape．The decrease of pRb expression in re tinoblastoma is closely related to tumor pathogenesis．

　　Key words　retinoblastoma Fas-L retinoblastoma protein apo ptosis immune escape

　　视网膜母细胞瘤是发生在儿童眼部的 一种常见恶性肿瘤，该肿瘤的发生与13q14的Rb等位基因的缺失或该位点等位基因的失活 有直接关系^［1～3］。Rb基因是目前公认的最早发现的抗癌基因，该基因产 物在很多肿瘤中有改变。Fas是一种细胞表面分子^［4］，可与其特异性配体Fa sL(CD95)结合，诱导细胞凋亡的发生。最新的研究表明，许多肿瘤细胞可表 达FasL，提示肿瘤细胞表达FasL可明显减弱Fas阳性细胞毒性淋巴细胞的攻击能 力，是肿瘤细胞逃避机体免疫攻击的新机制，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。FasL 在视网膜母细胞瘤中的表达的研究，目前在国内外均未见报道，本文拟在研究FasL和p Rb在视网膜母细胞瘤中的表达及与肿瘤发生发展的关系。

　　1　材料与方法

　　1．1　材料

　　研究对象：视网膜母细胞瘤45例及正常视网膜组织 12例(为1994年至1998年间存档蜡块)，标本处理前均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。

　　试剂：兔抗人FasL多克隆抗体(N-20）G（ 1∶300，Santa Cruz Co．），兔抗人Rb多克隆抗体(C-15）（1∶1 00，Santa Cruz Co．），SP试剂(biotinylated sec ond　antibody　and enzyme conjugate，Zymed Laboratories Inc）均购置于中山生物技术公司，DAB（Immuno tech Co．）。

　　1．2　方法

　　石蜡标本切4μm厚，经脱蜡，水化，消除内源性酶活性，血清封闭，分别加入一抗fasL(1∶300)和p Rb(1∶80)，在柠檬酸钠缓冲液中微波修复5min重复1次，4 ℃过夜；加入生物素化的二抗，室温孵育15min，再加入酶复合物，室温孵 育15min，DAB显色，苏木素复染。每例切片均由2位病理医生观察整个 切片，并根据阳性细胞的分布范围，分为：“0”表示阳性细胞数为0%，“1”表示阳性细胞 数1%～25%，“2”表示阳性表达细胞数在26%～50%，“3”表示阳性表达细胞数在51%～75% ，“4”表达细胞数在76%～100%。

　　阳性对照：Rb用肺癌组织中表达阳性的标本，Fas L用睾丸组织，结果均阳性。

　　空白对照：BPS代替一抗，结果均阴性。每次实验均设对照。

　　1．3　统计学处理

　　数据用均数±标准差表示，比较两组之间表达的差异，用非配对t检验，取P＜0.01为差异有显著性的标准。

　　2　结果

　　pRb在核内表达，染棕色或棕黄色，胞浆不着色，肿瘤 细胞灶状或散在阳性（1.778±

　　0.876），正常视网膜细胞表达均匀(2.833±1.115)(P＝0.0009)差 异具显著性。FasL主要在胞浆及胞膜上表达，核不表达，分布弥散(3.021±0.847)， 正常视网膜细胞全层表达(3.583±0.668)(P＝0.023)差异无显著性。FasL， pRb在视网膜母细胞瘤中的表达见图1，2。

1　视网膜母细胞瘤和正常视网膜 中FasL的表达

　　Fig．1　FasL exp ression in normal retina and retinoblastoma

2　视网膜母细胞瘤及正常视网膜 中pRb的表达

　　Fig．2　pRb expression in retinoblastoma and normal retina

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