2　视网膜血管发生的促进因素

　　2．1　星形胶质细胞

　　星形胶质细胞属于神经胶质细胞，在胚胎期首先出现在视盘附近的神经纤维层、神经节细胞层中，并从视神经向锯齿缘迁移，这一过程早于发育中的血管的迁移。在血管发育过程中，星形胶质细胞的排列与血管的排列大致相符，提示星形胶质细胞以某种方式支配或调节血管的生长或发生［10］。Jiang等利用视网膜血管发生的免疫组化分析显示，只有与星形胶质细胞接触的梭形细胞才能分化为血管内皮细胞。体外实验利用鼠星形胶质细胞和牛视网膜内皮细胞共同培养，星形胶质细胞可以诱导内皮细胞分化成毛细血管样结构，提示我们星形胶质细胞对血管的形成起促进作用［11］。

　　2．2　生长因子

　　生长因子是血液和组织自身形成的多肽物质，生长因子作为分子信号和介质与特定受体结合，单独或协同地促进细胞生长、增殖、分化。

　　促进血管新生的调节因子有很多，其中血管内皮生长因子（vascular　endothelial　growth　factor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic　fibroblast　growth　factor，bFGF)是到目前为止发现最强的促进血管新生的生长因子。

　　2．2．1　bFGF　bFGF广泛存在于人体各种组织中，它们对绝大多数中胚层来源的细胞，尤其是内皮细胞有很强的促分裂作用，是活跃的促血管形成生长因子。bFGF可促进新生血管形成［12］，对新生血管形成的多个环节如毛细血管基底膜降解、内皮细胞迁移、增生、胶原合成、小血管形成等均有明显促进作用。

　　Kimura等在兔视网膜下植入含有bFGF的胶囊，可引起视网膜下新生血管生成［13］；Amin等发现bFGF在老年性黄斑病变患者的脉络膜新生血管膜上的表达呈强阳性［14］，表明bFGF与眼部新生血管有着密切的关系。而bFGF在牛、人胚胎视网膜内也发现有表达。Ishigooka等发现牛胚150、180天的内层及外层视网膜血管呈现bFGF阳性反应，此阶段为外层血管出现的时期；而在第90、120天时即内层血管形成时期，bFGF在内层血管仅呈现弱阳性反应［15］。李爱冬研究了人胚胎视网膜内bFGF的表达，发现节细胞、血管内皮细胞、视锥细胞呈阳性反应［16］，以上表明bFGF可能与视网膜增殖、分化及血管发生有关。

　　2．2．2　VEGF　VEGF是近年新发现的在机体内广泛存在、具有促进血管生长作用的生长因子，其促分裂作用仅限于血管内皮细胞，在胚胎发育期的组织和处于分化状态下的细胞VEGF表达高于成年组织和分化完全的细胞［17］。

　　VEGF表达的调节机制目前还不清楚，一般认为低氧可能诱导VEGF表达［18］，而VEGF在卵巢、子宫、黄体等甾体反应细胞的高表达提示VEGF可能受激素的调控［19］，另外某些生长因子也有诱导VEGF的作用，如表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，EGF）、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)、bFGF等。

　　VEGF通常与血管内皮细胞上的特异性受体结合后，受体酪氨酸残基发生磷酸化反应，引起细胞内许多酶和其它反应，促进内皮细胞增殖，诱导血管形成。Connoly将纯化的VEGF加入小牛主动脉内皮细胞培养液中，发现细胞数增加［20］；杨亚东等从人胎肝cDNA文库中克隆出人的VEGF基因，并用基因工程的方法，表达和纯化出人的VEGF蛋白，而且证明这种VEGF具有促进血管生长和血管通透性的活性［21］。Ozaki等给家兔玻璃体腔植入VEGF缓释物，植入7天后，可见视网膜血管扩张弯曲，14～21天之间所有植入VEGF的视网膜上均见异常新生血管生成［22］。

　　Ferrara等对胎鼠脑切片进行原位杂交研究，结果胚胎发育第14天发现VEGF　mRNA广泛分布并具有高水平，且其表达与胚胎发育组织中的血管增殖有关［23］。Flamme研究VEGF在鹌鹑胚胎内的表达时发现，VEGF在未孵育的胚盘中表达为低水平，而从第2天开始可以发现大量表达，但主要存在于卵黄囊血管周围部分，不久以后在所有器官中都可以发现VEGF的存在［24］。

　　由此可见VEGF与胚胎期血管形成有密切关系，对胚胎的生长发育具有重要的调节作用。

　　1948年Michaelson首次推测视网膜血管在生长发育期，视网膜内存在血管形成因子，而1980年Glaser首次直接证明哺乳动物的视网膜内有血管生成素的存在，人、牛和兔的视网膜提取物，能够在牛血管内皮细胞培养中刺激细胞增殖和胸腺核苷吸收的能力，同时还可刺激鸡胚卵黄囊膜新生血管的形成［25］。近几年人们认为视网膜内血管生成因子为VEGF，Pe’er及Lutty等研究PDR病人视网膜中VEGF的表达发现，在无糖尿病的视网膜中VEGF表达为阴性或仅有少量表达，而有糖尿病者其表达增加［26，27］；Okamoto等将人VEGF基因导入小鼠体内，制成转基因鼠，利用RT-PCR和Northern　blots技术检测转基因鼠视网膜内VEGFmRNA，发现其表达增加，并发现视网膜内及视网膜下有新生血管形成，表明视网膜内VEGF过表达是引起视网膜内及视网膜下新生血管形成的重要因素之一［28］。Dorey等将新生鼠放入氧浓度为80％的气体中8天，然后放入正常空气中，使视网膜相对缺氧，随后按不同时间处死，进行原位杂交发现在内核层表达有大量VEGFmRNA，稍后此部位发现大量新生血管［29］，表明缺氧可以导致视网膜内VEGF表达增加，新生血管形成。

　　由此可想到发育早期的视网膜是无血管的，氧及营养需从含氧丰富的脉络膜毛细血管扩散至视网膜，因胚胎期视网膜较厚导致扩散距离增加，视网膜相对缺氧，可能引起血管形成因子增加，促进血管形成。Murata等利用免疫组化及原位杂交研究了出生后3，7，14，30天鼠视网膜内VEGF的表达，发现第3，7天时即视网膜血管发生活跃时期，VEGF mRNA及VEGF表达增加，而出生后第14天，血管发生活性下降，VEGF表达减少［30］。Stone［31］等也探讨了发育中的鼠和猫视网膜中VEGF的表达，发现在视网膜最内层即神经纤维层、内核层有表达，其部位接近视网膜的表层、深层血管，与血管形成有着密切关系。这些结果说明VEGF在视网膜发育过程中，对视网膜血管发生具有重要的调节作用。

　　视网膜新生血管形成的机理比较复杂，并不是仅由几种新生血管生成因子的作用结果，可能由多种新生血管生成因子和抑制剂、拮抗剂共同作用导致血管新生，如视网膜、玻璃体中可能存在抑制新生血管生成的因子，在发育过程中使玻璃体血管退化或在成人中抑制新生血管生成，而此过程目前了解甚少，研究胚胎视网膜血管发生的过程及调节因素有助于明确此过程，为治疗眼内血管性病变也可以提供理论基础。

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