3　讨论

　　3．1　人眼角 膜基质细胞体外培养

　　George等人认为角膜的炎症和免疫反应主要发生于基质区 ［1］，角膜基质主要由基质细胞、胶原纤维和细胞外基质组成。基质细胞是角膜炎症反应的主要靶细胞。培养后的基质细胞(keratocytes)有典型的成纤维细胞特征， 又称角膜成纤维细胞(corneal　fibroblasts)，与上皮和内皮细胞较易鉴别。传3代以内基质细胞形态、结构和生物学特性与原体内细胞相近，适于体外试验。当细胞传5代以上或以极低密度传代(6个细胞／mm2)时，大部分成纤维细胞转化为肌成纤 维细胞(myofibroblasts）［2］。故本实验选用高密度传2～3代细胞，既保证实验所需细胞数量，又排除了细胞转化对实验的影响。

　　3．2　体外培养的人角膜基质细胞ICAM-1表达

　　体外培养的角膜基质细胞可基础表 达一定量的功能性ICAM-1，染色后于光镜下明显可见，而不像正常角膜组织中基质细胞表达ICAM-1那么微弱［3］。体内处于静止状态的基质细胞属于功能Ⅰ型细胞，绝大多数为非增殖态的G0期细胞，当受到创伤或感染时，即可被激活，转化为成纤维细胞，进入增殖状态［4］，这两种细胞在结构和功能上有很大不同，成纤维细胞 分泌细胞外基质和金属蛋白酶及表达细胞粘附分子增加［5］。体外培养的基质细胞生理特性如体内激活的成纤维细胞，故有人用培养基质细胞模拟体内创伤愈合过程中成纤维细胞的变化［6］。本实验证明，正常状态下微弱表达ICAM-1的角膜基质细胞，经体外培养后，其表达水平升高。WATA等人发现，角膜上皮细胞ICAM-1的功能性 表达可伴发于细胞的生长增殖和迁移［7］。体外培养角膜成纤维细胞ICAM-1 的表达及调节，未见有文献报道。

　　3．3　LPS及IFN-γ对基 质细胞表达ICAM-1的影响

　　LPS又称细菌内毒素(endotoxin)。有研究表明 ，LPS可促进多种细胞表达ICAM-1［8］。本研究显示：LPS上调基质细胞表达 ICAM-1。加药6h表达水平有大幅度上升，12h达高峰，24h有所下降，说明L PS可直接作用于基质细胞，使其迅速表达ICAM-1，通过与白细胞表面的配体(白细胞 功能相关抗原-1）结合，促进白细胞迁移聚集于炎症部位，导致一系列炎症反应。

　　细胞 因子在色素膜炎和角膜炎的发病机制中起重要作用。Elner等人证明，IL-1β、T NF-α和IFN-γ均可诱导角膜内皮细胞大量表达ICAM-1，从而介导内皮细胞与中性粒细胞粘附，导致KP形成［9］。本研究结果表明，IFN-γ作用于基质细胞 后ICAM-1表达增加，并呈时间和剂量依赖性。IFN-γ主要产生于角膜炎的后期，是由淋巴细胞衍生的，它对基质细胞表达ICAM-1的上调作用，对基质内白细胞的聚集 、粘附和活化可能起促进作用。

　　本实验从定性到定量研究了培养的基质细胞ICAM-1的表达及LPS和IFN-γ对其表达的上调作用，得到一致的结果。

　　目前，对于基质细胞 表达ICAM-1的确切作用还不十分清楚，进一步研究ICAM-1及其它细胞粘附分子在角膜炎症反应中的作用途径，对于阐明角膜炎症发生机制以及有选择地封闭细胞粘附分子，从而减少或阻止白细胞介导的组织损伤来治疗角膜炎症有重要的意义。

　　参考文献：

　　1，George O，Merlyn M．Patterns o f pathologic response in cornea．Surv Oph thalmol，1987，31∶262

　　2，Petridou S，Masur SK．Immunodetection of cornexins and caderins in corneal fibroblasts and myofibroblasts．Invest Ophthalmol Vis Sc i，1996，37∶1740

　　3，Pavilack MA，E lner VM，Elner SG，et al．Differential expr ession of human corneal and perilimbal I CAM-1 by inflammatory cytokines．Invest O phthalmol Vis Sci，1992，33∶564

　　4，鄂征，主编．组织培养和分子细胞学技术．北京：北京出版社，1995．22-23

　　5，Masur SK，Cheung JKH．Indentifica tion of integrins in cultural corneal fi broblasts and in isolated keratocytes．In vest Ophthalmol Vis Sci，1993，34∶2690

　　6，Jester JV，Barry PA，Lind GJ，et a l．Corneal keratocytes，in situ and vitro organization of cytoskeletal contractile proteins．Invest Ophthalmol Vis Sci，1994 ，35∶730

　　7，Wata M，Suzuki M，Suzu ki Y，et al．Strong expression of ICAM-1 in the leading zone of the human cornea epithelial cell culture．Invest Ophthalmo l Vis Sci，1994，35（4）∶228

　　8，Wut hrich RP．Intercellular adhesion molecule s and vascular cell adhesion molecule-1 and the kindey．J Am Soc Nephrol，1992，3∶1 201

　　9，Elner VM，Elner SG，Pavila c k MA，et al．Intercellular adhesion molecu le-1 in human corneal endothelium：modula tion and function．Am J Pathology，1991，13 8∶525

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