中华眼科杂志 2000年第1期第36卷 眼表疾病
作者：董晓光 谢立信 张新晨 史伟云 李伟 袁风波
单位：董晓光（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）；谢立信（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）；张新晨（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）；史伟云（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）；李伟（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）；袁风波（青岛，山东省医学科学院眼科研究所 266071）
关键词：角膜；角膜移植；穿透性；保存液；中期
【摘要】 目的 研制一种适合我国眼库使用的保持角膜活性的中期保存液。方法 配制新的角膜活性中期保存液(DX液)，按不同天数保存兔角膜植片，分别进行角膜内皮细胞活性率、酶组织化学联合染色及超微结构观察，并将在DX液中保存2～11 d的37只人眼角膜植片应用于临床穿透性角膜移植手术中。结果 兔实验结果显示，DX液与Optisol液差异无显著性(P＞0.05)。37只人眼角膜植片术后1周内全部透明，内皮细胞密度均值为(2 204.56±689.56)个/mm2。结论 DX液作为我国眼库角膜活性中期保存液安全可靠。
A report on investigation and clinical application of corneal storage media
DONG Xiaoguang, XIE Lixin, ZHANG Xinchen
（Institute of Ophthalmology, Shandong Academy of Medical Sciences(Email: lixinxie @ public.qd.sd.cn), Qingdao 266071，China）
【Abstract】 Objective To develop intermediate term storage media suitable for Chinese eye banks. Methods Corneal buttons of rabbits were stored in DX solution freshly prepared. After storage for several days, the survival rate of the corneal endothelial cells was examined, enzymohistochemical staining and ultrastructural examinations were carried out for the buttons. Thirty-seven human corneas stored in DX solution for 3-11 days were used for corneal transplantation, clinically. Results There was no significant difference between rabbit corneal buttons stored in DX sol. and in Optisol in any indices studied. 37 grafts were all transparent in 1 week after transplantation, and the mean endothelial cell density was (2 204.56±689.56) cells/mm2. Conclusion As a safe and efficient intermediate term (about 1 week) storage medium, DX sol. is appropriate for Chinese eye banks.
【Key words】 Cornea； Keratoplasty, penetrating； Storage media； Mid-term
自M-K液［1］问世以来，角膜活性中期保存技术已成为各国眼库保持角膜活性最主要的方法［2，3］。Optisol液为目前各国最常用的角膜中期保存液［4］，但由于价格和来源等原因，目前在我国尚难以推广应用。为了解决这一问题，我们研制了一种新的、适合于我国国情的角膜活性中期保存液（DX液）并应用于临床，现将其结果分析、报告如下。
材料和方法
1.DX液的配制：以细胞培养基MEM（美国Gmbh公司）作为基础液，加入0.05 mmol/L地塞米松（上海新华制药厂）、2.5%硫酸软骨素（美国Sigma公司）、1%葡聚糖（分子量4×104，上海化学试剂厂）、105 U/L妥布霉素、0.03% L-谷氨酰胺，用HEPES (美国Sigma公司)缓冲液调节，pH为7.2～7.4，渗透压浓度为350～410 mmol/L。每20 ml分装，4℃冰箱保存，备用6个月。
2．兔角膜内皮细胞活性观察：取新西兰白兔带2 mm宽巩膜的全层角膜片74只，其中37只分别置于20 ml DX液中，另外37只分别置于20 ml Optisol液中做对照。4℃下保存，于第5、7、10、15、20天，在两液中分别任选5只角膜片行0.25%茜素红和1%台盼蓝联合染色［5］，计算内皮细胞活性率。
3.兔角膜内皮细胞酶组织化学染色：取上述保存7、15 d的角膜片各4只，共16只，做常规组织冷冻切片，行酶组织化学染色，包括琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶染色，并应用德国产VADAS-21型显微图像分析系统，定量测定各种酶染色的透光密度值。
4.兔角膜内皮细胞超微结构观察：取上述保存10、20 d的角膜片各2只，共8只，进行常规处理或制作超薄切片，在日本JEOL公司生产的JEM-840型扫描电镜和日本JEOL公司生产的JEM-1200EX型透射电镜下，观察内皮细胞超微结构。
5.临床应用观察：由眼库提供因各种原因死亡后6 h内取下的人眼健康角膜67只，分为两组，一组37只保存于DX液中，另一组30只保存于 Optisol液中，保存不同时间后，均用于临床穿透性角膜移植手术中。在手术时用联合染色方法观察钻取植片后剩余的周边角膜内皮细胞的活性率和活性密度［5］，并在术后1周内用日本TOMY公司生产的EM-1020型内皮显微镜观察植片内皮细胞的形态和密度，进行内皮细胞图像分析。
6.统计学处理方法：临床观察指标均采用Foxpro建立数据库，SPSS 6.0软件包进行统计学处理，所有数据均经统计学t检验。
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