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讨论
本实验由不了解临床背景的技术人员实施, 并判定结果。所采用的多重引物PCR, 在每一反应体系中可同时扩增GSTM1基因及内参照GSTM4基因。实验结果显示, 每个受检样本的PCR反应均出现了157 bp内参照扩增产物, 未出现非特异性扩增, 表明采用的PCR方法具有良好的特异性和敏感性, 对GSTM1基因分析是准确的。
Sekine等［10］、皮静波等［11］检测老年性白内障患者外周血细胞中GSTM1基因, 结果显示老年性白内障的发病与GSTM1基因缺失密切相关。而Alberti等［12］的研究表明，意大利人群GSTM1基因缺失与老年性白内障的发生及晶体混浊程度缺乏显著关系。本研究资料显示, 中国汉族人老年性白内障患者外周血细胞GSTM1基因缺失率为53.25％, 与正常对照组比较差异无显著性。
为了避免不同组织具有GSTM1多态性差异, 我们平行检测了老年性白内障患者的外周血细胞和晶体上皮细胞的GSTM1基因缺失率。从国内外文献报道来看, 本文首次分析了老年性白内障患者晶体上皮细胞GSTM1基因缺失率, 结果表明老年性白内障患者外周血细胞和晶体上皮细胞中GSTM1基因缺失率基本一致。
GST在晶体中的表现型具有种属的特异性。Pickett等［13］研究表明, 人晶体中存在GSTμ和GSTπ 2种同工酶, 其中GSTπ占优势, GST酶活性决定于π族。因此，晶体中单纯GSTμ酶的缺乏对整个抗氧化系统不是重要因素。Nishinaka等［5］报道, 猪晶体GSTπ较牛晶体GSTμ对氧张力(oxidative stress)更敏感, 当暴露于不同浓度H2O2时, GSTπ酶活性显著低于GSTμ, 而GSTμ对氧紧张具有较强抵抗力。因此, 当人晶体中GSTμ缺乏, 而同时伴有可能的GSTπ活性降低, 如环境或某些修饰基因(moditying gene)的影响时, 使得GSTμ缺乏有可能成为某些人群中白内障发生的易感因素之一［12］。此外, 老年性白内障的发病程度不同, 可能是本组结果与其他报道不同的可能因素之一。本组资料中,白内障患者包括初发至成熟各期,而Sekine等［10］报告中，白内障患者主要为近成熟而接受手术者。本组样本数相对较小,白内障患者GSTM1基因缺失率虽有增高趋势,但差异无显著性,故有待于扩大样本调查。尽管各家报道不同,GST在保护晶体免受超氧化损伤方面确有其重要作用,而且被疑为是白内障发生的危险因素之一［14］。但晶体内抗氧化系统是一复杂反应系统。根据本实验,我们认为GSTM1基因缺失至少不是老年性白内障发生的主要易感因素。
在本研究中,我们同时比较了晶体上皮细胞及外周血细胞中GSTM1基因检测,二者具有极显著的一致性(P＜0.001)。这说明即使晶体在胚胎发生、发育过程与周围环境隔绝,具有特殊性,但晶体上皮细胞内基因组DNA与体细胞相同。尽管晶体上皮细胞数量不多,但PCR方法使检测晶体上皮细胞DNA成为可能。
此外,本组资料中男女比例不均衡,但根据以往报道［7，10，12］,男女间GSTM1基因表达差异无显著性,故认为性别并不影响本组数据的可靠性。
本课题受中华眼科学会麦格科研基金资助(基金编号102032)
参考文献
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13 Pickett CB, Lu AY. Glutathione S-transferases: gene structure, regulation, and biological function. Annu Rev Biochem,1989,58:743-674.
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(收稿：1998-06-01 修回：1998-11-05） 上一页 [1] [2] |
