中华眼底病杂志 1999年第4期第15卷 论著
作者：傅涛 宋绣雯 李利 张东魁
单位：450052 郑州，河南医科大学第一附属医院眼科(傅涛、宋绣雯、李利)；安阳市眼科医院(张东魁)
关键词： 视网膜母细胞瘤/免疫学；内皮，血管；内皮生长因子；免疫组织化学
【摘要】 目的 研究视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达与RB组织学分裂和浸润能力的关系。 方法 应用链霉亲和素蛋白-生物素酶标免疫组织化学方法(labell streptavidin biotin method,LSAB法)，对40例RB组织中VEGF的表达进行分析。 结果 分化型RB(13例)组织VEGF表达低于未分化型(27例)(P＜0．05)；视神经浸润组(14例)VEGF表达明显高于视神经未浸润组(26例)(P＜0．05)。 结论 VEGF表达与RB组织学分型及浸润能力相关。
中国图书资料分类法分类号 R739．7 R446．6
Immunohistochemical studies on vascular endothelial growth factor in retinoblastoma
FU Tao,SONG Xiuwen,LI Li,et al.
Department of Ophthalmology,the First Affiloated Hospital,Henan Medical University,Zhengzhou 450052,China
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)and the retinoblastome(RB)differentiation degree and the infitration capability． Method The VEGF expression in RB tissues of 40 cases was analysed by using LSAB immunohistochemical method． Results The VEGF expression in differentiated RB tissues of 13 cases was markedly lower than that in non-differentiaed RB tissues of 27 cases(P＜0．05);The VEGF expression in RB tissues of the optic nerve infiltrated group(14 cases) was significantly higher than of the optic nerve non-infiltrated group(26 cases)(P＜0．05)． Conclusion The results indicate that the VEGF expression is signficantly related with the differentiation degree and infiltration capability of RB．
【Key words】 Retinoblastoma／immunology Endothelium,vascular Endothelial growth factors Immunohistochemistry
血管内皮生长因子(VEGF)是新近确定的一种促血管生成因子，是具有高度潜能的血管内皮细胞分裂素［1］，并可增加血管通透性［2］。研究表明，VEGF在多种肿瘤血管基质形成中起重要作用。视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿较常见的眼内肿瘤，生长因子在调节RB生长过程中的作用了解甚少。我们采用LSAB免疫组织化学法探讨VEGF在RB组织中的表达情况。
1 材料和方法
1 ．1 材料 40例RB组织来自洛阳医专附属医院、邢台市眼科医院、安阳市眼科医院1987年1月～1997年6月间存档蜡块，RB患儿术前均未行化学治疗和放射治疗。10例正常视网膜组织取自无眼球疾病的供角膜移植后的供体眼球，作为正常对照。
1．2 主要试剂 抗VEGF抗体(工作浓度1∶100)、LSAB试剂盒分别为Santa Crus、Zymed公司产品，购于中山生物技术有限公司。
1．3 实验方法 ①参照文献［3］作组织病理学分型；②VEGF免疫组织化学染色，采用LSAB免疫组织化学方法，作微波抗原修复；③实验对照采用结肠癌VEGF阳性表达组织作阳性对照；磷酸缓冲液及正常羊血清代替I抗分别作空白对照和替代对照。
1．4 结果判定［4］ 以细胞浆着淡黄色至棕褐色颗粒为阳性细胞，计数5～10个视野，分别按 、 标准计分：阳性细胞数＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%和75%以上分别为阴性、1分、2分、3分和4分；按阳性反应强度，淡黄色计1分，黄色计2分，棕黄至棕褐色计3分。二者相乘，1～4分为弱阳性(＋)，6～8分为中等阳性（＋＋），9～12分为强阳性(＋＋＋）。
1．5 统计学处理 采用频数表资料两样本比较的秩和检验，取P＜0．05为显著性检验标准。
2 结果
2．1 VEGF免疫组织化学染色 40例RB组织中，37例VEGF阳性表达（92．5％)，为细胞浆着色，呈黄至棕黄色均匀细颗粒状。阳性细胞主要为肿瘤实质细胞(图1)，坏死区周围细胞强表达。假菊形团结构中，阳性细胞多分布于其外围，近中央的肿瘤细胞不表达(图2)。另外，血管内皮细胞亦可见阳性染色(图3)。10例正常视网膜组织中，仅1例有弱的VEGF阳性表达，定位于视锥视杆层(图4)。
2．2 VEGF表达与RB组织学分型的关系 40例RB组织中分化型13例，未分化型27例。分化型RB细胞VEGF表达较弱，而未分化型RB细胞VEGF表达较强，经统计学检验，两型间VEGF表达有差异(P＜0．05)(表1)(图1，5)。
2．3 VEGF表达与RB细胞浸润视神经的关系 视神经浸润组14例，其VEGF表达明显强于26例视神经未浸润组，分化型与未分化型RB视神经浸润有显著差异(P＜0．05)(表2)。
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