中华眼底病杂志 1999年第2期第15卷 增生性玻璃体视网膜病变研究
作者：姜彩辉 张卯年 张鲲
单位：100853北京，解放军总医院眼科
关键词： 眼损伤，穿透性/药物疗法；玻璃体视网膜病，增生性/药物疗法；维拉帕米/治疗应用；疾病模型，动物
【摘要】 目的 观察维拉帕米(verapamil,Ver)对眼后节穿通伤增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的影响。方法64只青紫蓝兔，每只兔任选其中一只眼制备外伤性PVR模型后随机分为两组，治疗组在模型制备后立即每日结膜下注射2.5 mg/ml的Ver0．5ml，对照组则每日结膜下注射生理盐水0.5ml，共21天。模型制备后7天内每天用裂隙灯显微镜及间接立体检眼镜观察伤口、角膜、前房及眼底情况，此后每周第3，7天各检查1次。伤后第35天时常规摘除模型制备眼作光镜观察。结果 在模型制备后第35天，治疗组18只眼发生牵引性视网膜脱离，占56.3%，对照组26只眼发生，占81.3%(χ2=4.655，P=0.031)；玻璃体视网膜增生程度治疗组较对照组明显减轻(秩和检验，u=3.5419，P＜0.001)；未发现Ver对角膜上皮有明显毒性反应。 结论 结膜下注射Ver能有效抑制外伤性PVR的发展，减少牵引性视网膜脱离的发生率；Ver在实验所用剂量对角膜上皮无明显毒性反应。
中国图书资料分类法分类号 R774.1 R770.5 R965.1
The therapeutic effects of subconjunctival verapamil on experimental traumatic proliferative vitreoretinopathy
jIANG Caihui,ZHANG Maonian,ZHANG Kun,Department of Ophthalmology,the General hospital of PLA,Beijing 100853,China.
【Abstract】 Objective To investigate the therapeutic effects of subconjunctival verapamil on outcome in an experimental model of traumatic proliferative vitreoretinopathy. Methods An experimental model of traumatic proliferative vitreoretinopathy was induced in pigment rabbits,which then were selected randomly to receive either subconjunctival verapamil injection treatment or a placebo injection(control)daily for 3 weeks.Animals were examined by indirect ophthalmoscopy at weekly intervals for 5 weeks.Eyes were enucleated for light microscopy 5 weeks later. Results Fifty-six percent(18 of 32)of the rabbits receiving subconjunctival verapamil injection had developed tractional retinal detachment,whereas eighty-one percent(26 of 32)of control animals had developed tractional retinal detachment(χ2=4.655,P=0.031).The results of clinical examination and light microscopy didnt show evidence of toxicity between the verapamil treated animals and control animals. Conclusion Subconjunctival verapamil decreased the incidence of tractional retinal detachment due to traumatic proliferative vetreoretinopathy in this rabbit model.Verapamil at the dose used in this model has no evident toxicity on rabbit eyes.Further studies are needed to determine the doseresponse and efficacy of the drug.
【Keywords】 Eye injuries, penetrating／drug therapy Vitreoretinopathy, proliferative／drug therapy Verapamil/application Disease mldels,animal
外伤增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼组织对创伤修复的一种过度增生的结果，它以细胞迁移进入玻璃体和视网膜表面及增生为特征，最后细胞收缩导致视网膜脱离。目前，玻璃体视网膜手术已取得长足进展，但手术并不能有效阻止细胞的迁移、增生，甚至可刺激细胞发生迁移、增生，导致PVR复发。因此探索药物防治外伤性PVR受到广泛关注。近年来，随着Ca2+的生物学效应不断被发现，钙通道阻滞剂的应用范围不断扩大。国内外学者研究认为，Ca2+是细胞增生的启动因子，其浓度变化对细胞生长及有丝分裂具有调控作用［1］。同时，第二信使Ca2+的变化是PVR发病机制之一［2］。我们选择钙通道阻滞剂维拉帕米(Ver)，观察其对外伤性PVR发生、发展的防治作用。
1 材料与方法
1.1 材料 手术显微镜(TOPCON，日本)，显微手术器械，间接检眼镜，裂隙灯，离心机(VCB-Technam,法国)，光学显微镜(OLYMPUS，日本)。盐酸Ver注射液(江苏连云港制药厂)，复方氯胺酮注射液(军事医学科学院)。
1.2 方法 青紫蓝兔64只，解放军总医院实验动物中心提供。体重2.5～3.5kg，雌雄不限，肌肉注射氯胺酮35mg/kg，每只兔任选一只眼分离上方9～3点的球结膜及筋膜，在角膜缘后1.5～2.0mm处用巩膜穿刺刀刺向玻璃体中心部，勿伤及晶状体及周边视网膜，用剪刀向两侧扩大切口，伤口与角膜缘平行，达8mm，轻压眼球，将脱出的玻璃体剪除，用8-0尼龙线间断缝合切口［3］。检查眼底，排除眼内出血及视网膜脱离。以5ml注射器抽取耳动脉血5ml，1500 r/min离心5分钟，制备富含血小板的血浆(血小板计数器测定血浆中血小板数量为2.24×108/ml～2.71×108/ml)，用1ml注射器吸0.4ml血浆(玻璃体内血小板的实际数量级是107)注入玻璃体制备眼外伤模型。将致伤后的动物随机分为2组，每组32只眼，治疗组在制备模型后立即每日结膜下注射2．5mg/ml的Ver0．5ml；对照组每日结膜下注射生理盐水0.5ml。共21天。模型制备后7天内用裂隙灯显微镜及间接检眼镜每日观察伤口、角膜、前房及玻璃体视网膜情况，玻璃体视网膜增生程度分级同文献［4］，大于或等于3级为牵引性视网膜脱离。此后每周第3，7天各检查1次。根据每一观察时间点每一级别的级数乘以该级别的实际检出眼数，并将各乘积相加再除以该时间点观察的眼数，计算出每一时间点增生程度的平均值。在模型制备后第35天摘除眼球，15%福尔马林固定，石蜡包埋切片，光镜观察。
1.3 统计学处理 采用美国SAS统计软件进行χ2检验及秩和检验，P＜0.05作为显著标准。
2 结果
所有实验动物在实验观察期间均健康存活，进食及精神状态正常。结膜及角膜上皮无溃疡、糜烂缺损。模型制备后玻璃体腔内立即出现灰白色混浊团，边缘不清，半透明，混浊与伤道相连。伤后第1天，玻璃体混浊加重，范围扩大。伤后第3天，玻璃体混浊继续加重，尤以对照组明显，部分出现纱幕样玻璃体混浊，可见灰白色的玻璃体条索形成。伤后第7天，玻璃体混浊开始减轻，玻璃体条索逐渐增粗、增长，自伤口方向指向后极部视盘及髓线。视盘及髓线充血，血管走行纡曲。伤后第14天，玻璃体条索增粗、增长，并牵拉视盘及髓线，开始出现局部视网膜脱离及髓线视网膜皱褶。最早出现牵引性视网膜脱离(tractional retinal detachment,TRD)的时间对照组是第12天，治疗组是第15天。此后，玻璃体视网膜增生日趋加重，增生的玻璃体纤维条索牵拉视盘和髓线，出现视盘、髓线皱褶或髓线隆起，TRD数量增加。伤后第35天，对照组有15只眼视网膜脱离成漏斗状，而治疗组仅有3只眼发展至漏斗状视网膜脱离。在第14及21天治疗组与对照组的玻璃体视网膜增生程度有显著差异(秩和检验，P＜0.05)(表1)，第28及35天TRD发生数量有显著差异(χ2检验，P=0.035及P=0.031)(表2)。
表1 伤后玻璃体视网膜增生眼数(只)
Tab.1 The vitreoretinal proliferation following intravitreal injection(eye)
| Class |
Examination time(day) |
| Control group |
Experimental group |
| 3 |
7 |
14 |
21 |
28 |
35 |
3 |
7 |
14 |
21 |
28 |
35 |
| 0 |
27 |
10 |
2 |
3 |
1 |
1 |
30 |
12 |
8 |
6 |
4 |
2 |
| 1 |
5 |
20 |
6 |
4 |
1 |
0 |
2 |
18 |
6 |
10 |
3 |
2 |
| 2 |
0 |
2 |
16 |
14 |
5 |
5 |
0 |
2 |
15 |
11 |
8 |
10 |
| 3 |
0 |
0 |
6 |
8 |
2 |
2 |
0 |
0 |
3 |
4 |
12 |
8 |
| 4 |
0 |
0 |
2 |
3 |
15 |
9 |
0 |
0 |
0 |
1 |
4 |
7 |
| 5 |
0 |
0 |
0 |
0 |
8 |
15 |
0 |
0 |
0 |
0 |
1 |
3 |
| Mean |
0.16 |
0.75 |
1.88 |
2.13 |
3.66 |
3.97 |
0.06 |
0.69 |
1.41 |
1.50 |
2.38 |
2.78 |
Note:experimental and control group were compared *P＜0.05，**P＜0.01
表2 牵引性视网膜脱离发生眼数(只)
Tab.2 The incidence of tractional retinal detachment(eye)
| Time course |
Control |
% |
Experimental |
% |
χ2 |
P |
| 3 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
|
| 7 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
|
| 14 |
8 |
25.0 |
3 |
9.4 |
2.744 |
0.098 |
| 21 |
11 |
34.4 |
5 |
15.6 |
3.000 |
0.083 |
| 28 |
25 |
78.1 |
17 |
53.1 |
4.433 |
0.035 |
| 35 |
26 |
81.3 |
18 |
56.3 |
4.655 |
0.031 |
解剖显微镜观察发现90.0%以上伤口都嵌有玻璃体，玻璃体的纤维呈放射状展开并与睫状突及周边视网膜相连，并且可见从伤口向视盘或髓线及晶状体后走行的玻璃体纤维。增生最明显的位置是伤口及视盘，其次是髓线。光镜下，对照组玻璃体视网膜增生明显，玻璃体条索及纤维膜致密，含有大量的成纤维细胞样细胞及胶质细胞，偶尔可见巨噬细胞样细胞。第35天时玻璃体视网膜增生情况及TRD发生数量与临床检查结果基本一致。
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