|
3讨论
视网膜色素上皮细胞变性的典型症状为夜盲伴进行性视野缺损，眼底表现为视乳头蜡黄，视网膜血管变细，视网膜色素上皮斑驳状，骨细胞样色素沉着和视网膜电图异常为其特征。估计目前全世界已有患者约150万人，是眼底病致盲的重要原因之一。目前视网膜色素上皮变性等疾病缺乏有效的药物治疗。视网膜色素上皮细胞变性患者由于自身的视网膜色素上皮细胞变性、功能丧失或减弱，所以自身的视网膜色素上皮细胞不是理想的移植物。寻找可替代RPE细胞功能的细胞是移植的理想供体[24]。IPE细胞由于胚胎来源与RPE细胞相同而倍受关注。近年来自体IPE细胞移植成为RP治疗的研究热点。
虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium，IPE)在解剖学上与RPE具有相同的胚胎发育起源。IPE在形态结构与RPE细胞有很多相似之处。IPE具有许多与RPE相同的生理功能，如屏障功能、吞噬功能等。一定条件下IPE和RPE可以转化为晶状体上皮细胞、神经视网膜细胞等。在视网膜下腔IPE细胞还有可能转化为RPE细胞。因此，人们设想用自体IPE细胞来替代病变的RPE细胞，既达到治疗疾病的目的，又可避免同种异体的免疫排斥反应[58]。本研究发现，自体虹膜色素上皮细胞移植术后2wk，视力比术前略有提高。mfERG的b波振幅只有轻度变化，左眼视力从术前的0.15提高至0.2。多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升。mfERG检测视杆细胞、视锥细胞和双极细胞的功能，因此它比视力更准确地反应视网膜中心区的功能。本研究采用自体虹膜色素上皮细胞进行移植，这有效地避免了术后免疫排斥反应的发生。IPE细胞存活率一方面与细胞的数量和质量有关，另一方面与存活条件相关。细胞取材方法直接关系到细胞质量和数量，我们采用酶机械分离酶消化法获取色素上皮细胞，采用胰蛋白酶有利于减弱细胞间连接，然后在手术显微镜下用弯的钝头虹膜恢复器直视下轻刮使IPE细胞落入培养液中，这有效地避免长时间酶消化对色素上皮细胞的损伤，提高色素上皮细胞的存活率。由于上皮细胞间的群体效应色素细胞需达到一定数量才能再生融合形成单层结构，Binder等[9]研究体外研究显示老年人色素上皮细胞为再生融合形成单层结构而所需最少的细胞数为1500。本研究发现通过虹膜周边切除后用于分离、提取IPE细胞的虹膜组织的IPE细胞悬液(30μL×50/μL)可以达到这个要求。
移植后的IPE细胞粘附至Bruchs膜形成完整的血视网膜屏障功能对移植存活和移植物保持长期功能是至关重要的。本研究采用IPE移植专用的引导针穿刺入视网膜下腔，针头极细，穿刺入视网膜下腔时对脉络膜和视网膜色素上皮层损伤极小；患者移植IPE细胞后仰卧休息有利于IPE沉淀粘附于Brush膜上生长。本研究采用后巩膜外路法则由巩膜经脉络膜抵达视网膜下腔，其优点是不经过玻璃体，对玻璃体及视网膜神经上皮层无损伤，这避免了术后增殖性玻璃体视网膜病变的发生。手术后移植的IPE细胞粘附于Brush膜上生长而使RPE细胞层穿刺孔自闭。实验研究发现IPE细胞具有摄取、储存和代谢维生素Ａ的功能，呑噬色素颗粒，物质转运和形成单层细胞屏障等功能[10,11]。这提示IPE细胞基本具备RPE类似的生理功能，可望成为RPE的替代物，用于自体移植。本研究患者术后视力提高，眼底移植区色素沉着减少，未见渗出，出血，视网膜平复。多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升。这可能与移植的IPE细胞替代变性的RPE细胞执行RPE细胞生理功能，重建局部微环境，从而改善患者视功能有关。总之，目前对视网膜色素上皮变性等疾病尚无有效的治疗方法，自体虹膜色素上皮细胞移植作为视网膜变性疾病的再生性疗法，为视网膜变性疾病开辟新的治疗途径。
【参考文献】
1 Herse P. Retinitis pigmentosa: visual function and multidisciplinary management. Clin Exp Optom2005;88(5):335350
2冯霞,刘哲丽.视网膜色素变性的视网膜移植治疗.国际眼科杂志 2006;6(4):865868
3 Xie MS, Xu GX. Culture in vitro Modulation of Human Leukocyte Antigen Molecules and Costimulatory Molecules on Human Retinal Pigment Epithelium. Ophthalmologica2008;222(1):4852
4 Huang Y, Xu GX, Peng Y, at al. Zinc phthalocyanine tetrasulfonate (ZnPcS4): A New photosensitizer for photodynamic therapy in choroidal neovascularization. J Ocular Pharmacol Ther2007;23(4):377385
5 Xu GX, Yan J, Sun TS, et al. Primary culture of human retinal pigment epithelium in vitro. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi)2004;4(1):1215
6徐国兴.色素上皮细胞移植治疗视网膜变性疾病:问题与展望.眼科 2007;16(4):229232
7徐国兴.转化生长因子β2对培养的人类RPE细胞DNA合成增殖的影响.眼科 2003;12(1):30
8 Feng X, Liu ZL. Tramsplantation of retina on retinitis pigmentosa. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi)2006;6(4):865868
9 Binder S, Krebs I, Hilgers RD, et al. Outcome of transplantation of autologous retinal pigment epithelium in agerelated macular degeneration: a prospective trial. Invest Ophthalmol Vis Sci2004;45(11):41514160
10 Schraermeyer U, Enzmann V, Kohen L, et al. Porcine iris pigment epithelial cells can take up retinal outer segments. Exp Eye Res1997;65(2):277287
11徐国兴,杨娟,孙堂胜.溶血磷脂酸对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响.眼视光学杂志 2004;6(1):3844 上一页 [1] [2] |
