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3讨论
近年的研究发现,肿瘤细胞一般多对天然植物碱及其人工半合成衍生物类(如长春新碱、长春花碱、秋水仙碱等、鬼臼乙叉甙等)和抗生素类(如阿霉素、放线菌素Ｄ、柔红霉素、光神霉素等)药物易产生耐药和交叉耐药,而且不同组织来源的肿瘤其发生多药耐药的机制亦各不相同[5]。对MDR的研究对于改善肿瘤患者预后，制定合理的治疗方案以防止MDR出现或逆转MDR有重要意义。体外建立耐药细胞系国内外均见报道，常用的方法是浓度递增间断刺激法[6，7]，即通过在体外培养的亲代细胞中逐渐增加某一种化疗药物的浓度，通过药物选择作用获得耐药细胞系，为体外研究多药耐药提供模型。当然，药物在体内的代谢和作用过程远比体外复杂，不应单纯进行体外实验而忽视对临床标本的研究。
有关人ACC细胞体外实验的研究目前国内外多有报道，现已建立有SACC83，ACC-M等细胞系，并进行了一系列有关药物敏感性测试、放射治疗、生物治疗等方面的实验研究[8，9]。但是，体外环境远不如体内复杂，而且在体外培养过程中，肿瘤细胞的某些生物学特性可能会发生变化，与实际的过程可能有一定出入，因此体外实验得出的结论有时并不能完全解释肿瘤在机体内的生物学行为和病理过程。作为肿瘤细胞，ACC为无限细胞系，在体外可无限传代生长，但培养过程中失去了原有的腺管样排列结构，铺成片状，接近于实性型的细胞排列结构。我们以长春新碱为诱导剂，通过浓度递增间断刺激法在体外对ACC细胞系进行筛选和诱导耐药，建立了耐VCR的腺样囊性癌细胞系ACC/VCR。VCR是目前ACC化疗中最常使用的药物之一，也是化疗药物中最易产生耐药的一种。目前国内外多有建立肿瘤耐药模型的报道，VCR是最常使用的药物之一，浓度递增间断刺激法是最常见的诱导方法，它与临床上化疗药物的使用具有一定相似之处[6]。通过在体外建立耐药模型，可对肿瘤多药耐药机制进行研究，用于解释肿瘤在体内发生耐药的机制，还可以为耐药逆转剂的研究提供基础。 ACC和ACC/VCR细胞在生长曲线及群体倍增时间上无明显变化，在倒置显微镜下，细胞形态学亦无明显变化。但有研究表明，在电镜下亲代细胞和耐药细胞存在形态学变化。Prados等[10]在研究以放线菌素D（DAC）为诱导剂建立的横纹肌肉瘤耐药细胞系时发现，电镜下耐药细胞出现胞质内肌丝成分聚集、细胞器增多、双叶核等改变，细胞形态学的变化主要体现在超微结构上。
恶性肿瘤的药物敏感性研究一直是肿瘤治疗学研究中的热门问题，准确快速的肿瘤化疗药敏检测对指导临床选择化疗药，提高疗效具有重要意义[11,12]。但目前主要集中在实验室研究，真正进入临床前瞻性研究，指导临床治疗的还很少，尤其是在国内，尚未见进行临床试验的报道。目前对于ACC化疗效果的临床研究看法不一，对于化疗方案的选择差异很大。这可能与肿瘤的生物学特性（组织学分型、分化程度和细胞动力学等）、患者的个体差异（对化疗药物的敏感度和耐受程度）、药物本身的毒性反应等有关。在临床上常常使用同一种化疗方案治疗同一种肿瘤的不同患者甚至是患有不同肿瘤的患者，这显然是不科学的，针对不同患者进行肿瘤药物敏感试验以选择有效的化疗药物，制定个体化的化疗方案，才是今后化疗的发展趋势。我们选取的6种化疗药物，作用机制各不相同，且均是目前临床上比较常用的用于治疗ACC的化疗药物[13]。自1983年Mosmann首先利用MTT研究瘤细胞生存状况以来,MTT法药敏试验迅速建立并得到发展[4]。其染色剂是一种能接受氢原子的染料，化学名3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑嗅盐(3-(4,5-dimethylthiazol-2)-2,5-diphenyltetrazo－diumbromide，MTT)，商品名噻唑蓝，简称为MTT。MTT法的特点是灵敏度高、快速、简便、经济,不需放射性同位素,结果重复性好,并可同时对多种药物进行筛选和观察，可适用于所有肿瘤类型，目前美国国立癌症研究所已将其作为筛选化疗药物的常规手段。我们采用MTT法进行体外药物敏感性试验，结果显示，由亲代细胞诱导得来的耐药细胞ACC/VCR不仅对VCR耐药，而且对ADM，PYM发生了交叉耐药。这与目前研究认为多药耐药多见于天然来源的化疗药物的观点相符。通过MTT试验我们发现，化疗药物常规临床用量所达到的血药浓度多数对肿瘤细胞增殖达不到有效的抑制作用，然而通过无限制增加药物用量以达到杀灭肿瘤细胞目的的做法只可用于体外实验，在临床上盲目增大化疗药用量会大大增加对人体的毒副作用，甚至可能带来致命的后果。解决的办法有两个,一是通过逆转耐药剂的研制,增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,以减少用药量，减轻毒副作用；二是研发全新的药物剂型，使药物具有靶向性和缓释性的特点，肿瘤组织局部可以达到有效血药浓度而外周血药物浓度很低。例如，研制全新的多药耐药逆转剂，针对已知多药耐药相关基因进行基因治疗逆转耐药[14]，以及用具有缓释作用的纳米粒子包裹化疗药物进行主动靶向治疗的研究[15]，都会是今后化疗研究的新热点。
【参考文献】
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10 Prados J,Melguizo C,Marchal JA,Velez C,Alvarez L,Aranega A.Therapeutic diffeentiation in a human rhabdomyosarcoma cell line selected for resistance to actinomycin D. Int J Cancer ,1998;75:379-383
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13李雅冬.口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物现状.天津药学,2002;14:22-23
14李秀荣,吕翠霞,宋茂美,焦中华.肿瘤的多药耐药及耐药逆转剂研究.肿瘤防治杂志,2000;7:73-76
15赵硕,常津.载药纳米微粒制备技术.化学通报,2002;65:93-96 上一页 [1] [2] |
