3讨论

     近年来，临床观察发现，羊膜移植用于碱烧伤的眼表面后，减轻了局部炎症反应，促进了角膜上皮的再生，阻止了角膜血管化，瘢痕化，为临床治疗提供了一条有效途径[1-4]。本文旨在将兔角膜碱烧伤后行羊膜移植，观察其疗效，并从形态学找寻依据。

     本试验的结果显示：羊膜移植组较碱烧伤组炎症反应轻,分泌物少，新生血管生长慢并且密度也较小，角膜荧光素染色显示羊膜能明显促进角膜上皮细胞的生长。PMN计数经统计学处理得出，同期羊膜移植组较碱烧伤组炎性细胞少，并具有显著性差异。这是因为羊膜具有延长上皮生发细胞的寿命及维持其克隆增殖能力，增强基底上皮细胞的粘附，以及促进上皮细胞分化和阻止上皮细胞调亡的作用[5]。其上皮细胞分泌的HGF、bFGF、EGF、KGF等生长因子以及KGFR、HGFR等受体[6]，也促进了上皮的修复。同时，羊膜基底面与去除表层坏死角膜组织后较健康基质较为紧密的接触、封闭，能够显著减少通过泪膜侵入基质的大量多形核白细胞；羊膜基质能促使白细胞凋亡而消除炎症；其上皮细胞分泌的细胞因子能抑制PMN活化，减少炎性介质的产生及抑制其活化[7]。

     透射电镜的结果表明，正常对照组角膜上皮细胞形态规则，连接紧密。碱烧伤组角膜上皮细胞水肿，排列不整齐，细胞间隙增大，上皮细胞与前弹力膜的联接疏松，半桥粒数量较少，与严军等[8]的结果一致。该组胞质内细胞器变化表现为，基质中纤维细胞被激活为成纤维细胞，胞质内出现丰富的粗面内质网，有的区域还可看到高尔基复合体，这是因为新的蛋白质的合成和分泌离不开上述细胞器；同样时相段内细胞核中，常染色质丰富，这是细胞代谢功能代偿性增强的结果，异染色质可能部分转化为常染色质并螺旋化，以加快核内物质的转录效率，但损伤后细胞中的线粒体却不发达，并且出现肿胀现象，这可能是碱性物质对线粒体等细胞器的作用进行了破坏和抑制[9]。以上现象充分表明，碱烧伤后激活了静止的纤维细胞，使其成为成纤维细胞，从而大量分泌胶原纤维，促进创伤的修复。纤维组织增生虽然是眼表伤口愈合的必经过程，但过多的胶原分泌必将在眼表形成瘢痕，破坏角膜的透明度，对视功能产生严重影响。而同期的羊膜移植组的成纤维细胞数目低于碱烧伤组。这可能是因为羊膜移植于眼表后，首先起到了一个机械性的保护作用，防止基质层胶原组织暴露溶解；上皮细胞的修复，也使成纤维细胞处于细胞周期的G1期，抑制了其在角膜受损后的活跃功能，从而抑制了胶原的分泌及瘢痕的形成。另有研究证实，TGF-β1是一种在伤口愈合过程中调整成纤维细胞活性的纤维生长原型细胞因子，而羊膜具有抑制TGF-β1ｍRNA表达的作用[10]。

     本次实验通过兔眼碱烧伤模型的建立，证实了新鲜羊膜移植对碱烧伤急性期有较好的治疗作用，为我们的临床工作提供了坚实的实验依据。

    【参考文献】

1王峰,孙乃学,熊全臣,郭绒霞,杨建刚.新鲜羊膜移植治疗早期重症眼部烧伤.眼科新进展,2003;23(4):278-279

2张勐,赵平,江新利,张均.羊膜移植治疗兔早期角膜碱烧伤ICAM-1的表达.国际眼科杂志,2004;4(1):77-80

3刘肖艺,刘庆淮.兔角膜缘上皮细胞培养自体移植修复.国际眼科杂志,2005;5(1):83-85

4郑晓汾,冯克孝,李冰,杨纪忠,葛京京.兔角膜碱烧伤后不同时期的组织病理学变化.国际眼科杂志,2005;5(3):449-450

5 Park WC, Tseng SCG. Temperature cooling reduces keratocyte death in excimer laser ablated corneal and skin wounds. Invest ophthalmol Vis Sci ,1998;39(1):449

6 Koizumi NJ, Inatomi TJ, Sotozono CJ. Growth factor mRNA and protein in preserved human amniotic membrane. Curr Eye Res ,2000;20(3):173-177

7陈剑,丁琦,徐锦堂,吴静.新鲜羊膜移植对角膜急性炎症抑制作用的实验研究.眼科,2001;10(4):236-239

8严军,肖桃元,杨恬,黄文琪,可金星.兔角膜缘碱烧伤后修复的透射电镜观察.电子显微学报,2002;21(5):547-548

9凌诒萍,主编.细胞生物学.北京:人民卫生出版社,2001:87-169

10叶纹,沈玺,钟一声.兔角膜重度碱烧伤后羊膜移植的疗效观察.眼科新进展,2002;22(2):81-84

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