赵素霞 谢伯林 范泉水 陈斌 耿宇 舒越昆

解放军昆明总医院眼科 云南昆明 650032

目的 观察大鼠视网膜光化学损伤中TNF-α表达变化的规律，观察米诺环素对TNF-α分泌表达和对视网膜光损伤的影响。

方法 54只SD大鼠，雌性，体重200±20g，鼠龄8－10周。随机分为光照对照组、光照实验组，每一组再分为光照后6小时、3天、7天、14天组，另设正常对照组，每组分别6只大鼠。所有实验用大鼠（包括正常对照组）均在12小时明（120±30lux）和12小时暗（0lux）循环光环境适应一周，光照前暗适应24小时，光照前90 分钟，光照组大鼠分别灌胃米诺环素45mg/kg或等量蒸馏水。光照前和光照中充分散瞳，用光照强度为1737.9±393.0lux的绿色荧光灯作为致伤光源，连续照射36小时。光照结束后送回暗环境饲养，分别于光照后预定时间点麻醉大鼠后取眼球，左眼石蜡包埋、HE染色、TNF-α免疫组化染色，光学显微镜下观察各切片结构并拍照，图像分析仪测量视网膜ONL厚度。右眼球摘除后即刻完整取出视网膜，匀浆后取上清液，ELISA法测定TNF-α的O.D值，根据标准曲线算出出TNF-α浓度。采用SPSS14.0统计软件包进行统计分析。

结果 1.正常SD大鼠视网膜形态正常，结构层次清楚，内外节排列整齐规则，分界清晰，内外核层排列紧密，ONL 厚度为46.36±3.06μm。经连续光照射36小时后，各个观察时相外层视网膜均出现病理改变，主要表现为：外核层和外丛状层变薄，外核层细胞核间隙增大，内外节结构紊乱，分界不清，以光照后7天视网膜病理改变最明显。光照后各观察时间点，外层视网膜损伤情况米诺环素治疗组均较PBS 对照组为轻，其中光照后14天ONL厚度较正常对照组减少，减少量光照实验组为13.98％，光照对照组为31.04％，光照后14天ONL厚度光照对照组和正常对照组差别有统计学意义，而光照MC和正常对照组差别无统计学意义。2. 正常SD大鼠视网膜仅含微量TNF-α，免疫组化切片上未见明显阳性染色，ELISA测得浓度为38.75±7.83 pg/ml。光照对照组光损伤后,视网膜组织中TNF-a的阳性表达数目、着色程度及分布范围从光照后6小时开始增加，3天显著增加，3天时ELISA测得浓度为896.65±19.21pg/ml。7 天开始减少，14天进一步减少。光照实验组光照后也呈相似的变化规律，但均较光照对照组同一时间点为少，两组同一时间点比较，差别有统计学意义。光照实验组（除14天组外）和光照对照组各时间点分别与正常对照组比较，差别也均有统计学意义。光照实验组14天时，TNF-α含量已明显减少，和正常对照组相比差别无统计学意义。

结论 1.视网膜光损伤时，TNF-α表达增加且呈动态变化，与视网膜损伤程度密切相关，说明光损伤时过度表达的TNF-α参与并加重了视网膜光损伤。2.米诺环素能减少大鼠视网膜光损伤时感光细胞的丢失，对视网膜有保护作用，这种保护作用可能是通过抑制TNF- α分泌细胞的活性、减少TNF-α的过度分泌实现的。3.视网膜光损伤时，小胶质细胞很可能是TNF- α的主要分泌细胞之一。