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3讨论
我们实验所取细胞均为同一时期同一环境下培养所得，且均选取传一代细胞。并且前期实验表明，同种细胞在体外培养条件下生长增殖情况无明显差异，均于传代后8～10d生长接近融合。故本实验中，可基本排除其它因素，如培养附着介质、培养液的来源、培养室的温度、湿度、CO2浓度等对Müller细胞分泌VEGF所造成的影响。
3.1体外高浓度AGEs对Müller细胞的刺激增殖作用 实验显示，低浓度的AGEs（10～100mg/L）对Müller细胞的增殖活性无影响，而高浓度的AGEs有明显的刺激Müller细胞增殖的作用。且在一定浓度范围内，呈浓度依赖性，在1000mg/L时达到最大,超过最大作用浓度时反而表现为抑制增殖，可能是因为AGEs通过与细胞表面受体结合发生作用，当结合位点饱和后，剩余的AGEs不能发挥作用；另外过高的AGEs浓度产生毒性作用，从而抑制了细胞的新陈代谢。随着对糖尿病慢性并发症发生机制及病理改变的深入研究，并且由于ELISA、RRA、免疫组化分研究手段被引入对AGEs结构及其体内作用方式的探索工作，越来越多的事实表明：AGEs与各种AGE受体复合物之间的相互作用，不仅与被修饰的大分子的降解有关，更激活多个信号传导通路，导致多种细胞因子与生长因子的合成与释放启动组织修复和蛋白更新，更重要的是促使血管病变和糖尿病慢性并发症的发展[2]。AGEs作用的浓度依赖性可以解释只有当糖尿病患者体内AGEs浓度达到一定的水平时才会引起相应的视网膜病变，且AGEs含量越多，视网膜病变也越严重。我们在第一部分实验已证实，在糖尿病大鼠中，随着病程的延长，Müller细胞增生，GFAP表达增加，就可能与AGEs在视网膜中的不断积累有关。
3.2高浓度AGEs作用后，Müller细胞VEGF表达增加 已有证实，VEGF是导致PDR的主要致病因子[3]，VEGF具有特异性促进内皮细胞增殖，增加血管通透性，改变细胞图1不同浓度AGEs对Müller细胞增殖活性影响的比较
图2不同培养时间时VEGF的浓度
外基质的作用。在PDR中，VEGF通过作用于视网膜血管内皮细胞上大量高亲和力受体，促进血管内皮细胞的分裂、增殖，进而导致视网膜新生血管的生成[4]。有研究显示PDR患者的玻璃体腔AGE浓度显著高于没有糖尿病者，并且PDR患者玻璃体腔的VEGF浓度也明显升高[5]。通过本部分实验我们发现了AGEs能够促进培养的Müller细胞高表达VEGF。AGEs在体内的致病作用主要与VEGF的表达水平增高有关。Müller细胞是视网膜的主要神经胶质细胞，除了一般的营养和支持作用外，Müller细胞像脑胶质细胞一样，可以合成多种细胞因子，如VEGF、IL 6、NOS、bFGF、GDNF等，来影响视网膜的代谢活动[6]。Müller细胞在AGEs作用下增殖，并且表现出旺盛的VEGF分泌功能，可能于Müller细胞表达AGEs受体有关，其确切机制我们将在下一步研究中深入探讨。
本实验通过体外细胞培养技术，排除体内各种混杂因素的干扰，证实了高浓度AGEs可做为一个独立的刺激条件，促进培养的视网膜Müller细胞异常增殖，并大量表达VEGF。说明在DR发生发展过程中，玻璃体和视网膜内AGEs浓度增高可以直接导致Müller细胞病理性改变，引起视网膜中VEGF含量的增加，从而导致并加重了视网膜微循环的障碍。
【参考文献】
1叶辉，徐格致，王文吉. Müller细胞对视网膜血管内皮细胞紧密连接蛋白表达的影响.中华眼底病杂志2006;1（22）：2830
2 Vlassara H, Bucala R, Striker L. Pathogenic effects of advanced glycosylation: biochemical, biologic, and clinical implications for diabetes and aging. Lab Invest1994;70(2):138151
3 Robbins SG, Conaway JR, Ford BL, et al. Detection of vascular endothelial growth factor(VEGF) protein in vascular and nonvascular cells of the normal and oxygeninjured rat retina. Growth Factors1997;14(4):229241
4 Sueishi K, Hata Y, Murata T, et al. Endothelial and glial cell interaction in diabetic retinopathy via the functionof vascular endothelial growth factor(VEGF). Pol J Pharmacol1996;48(3):307316
5 Adamis AP, Miller JW, Bernal MT. Increased vascular endothelial growth factor levels in the vitreous of eyes with proliferative diabetic retinopthy. Am J Pathol1994;118:445 450
6 Tous S, ChanLing T, Hollander H, et al. The role of Müller cells in the formation fo the bolldretinal barrier. Neuroscience1993;55(1):291301 上一页 [1] [2] |
