缺血性视网膜疾病如增生型糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy，PDR)、视网膜中央静脉阻塞等血管阻塞性疾病、早产儿视网膜病变等是常见的致盲性眼病，视网膜新生血管的形成是其严重并发症。视网膜新生血管的形成是多种细胞因子 。、黏附分子心一、蛋白酶口’等相互作用的结果。最新研究发现轴突导向因子N e t r i n — l 具有促血管生成作用。“但是N e t r i n — l 在视网膜新生血管形成中的作用尚不清
楚。我们建立高氧诱导的鼠视网膜新生血管模型， 检测模型鼠视网膜新生血管发生过程中N e t r i n — l m R N A表达水平的变化， 探讨N e t r i n — l m R N A 表达的变化与视网膜新生血管形成的关系。

    1 材料与方法

    1 ． 1 材料

    S F P 级健康C 5 7 B L ／6 J 小鼠( 中南大学动物实验中心提供) ；右旋糖苷异硫氰酸荧光素( F I T C — d e x t r a n )( 美国S i g m a 公司) ；T r i z o l 裂解液及微量总R N A 提取试剂盒( 美国I n v i t r o g e n 公司) ；反转录及c D N A 合成试剂盒( 美国F e r m e n t a s L i f e S c i e n c e 公司) 。

    1 ． 2 实验方法

    1 ． 2 ． 1 高氧诱导的视网膜新生血管小鼠模型的建立S F P 级新生C 5 7 B L ／6 J 小鼠( 5 0 只) 。采用随机数字表法将5 0 只小鼠分为模型组( 2 5 只) 和正常对照组( 2 5 只) 。参照S m i t h 的方法建立小鼠缺氧诱导视网膜新生血管动物模型” 。出生后第7 d 的C 5 7 B L ／6 J 小鼠与母鼠一起置于氧浓度为( 7 5 - 4- 2 ) ％ 的氧箱中5 d ， 于出生后第1 2 d 回到正常环境中诱导视网膜新生血管模型。

    1 ． 2 ． 2 荧光素心脏灌注视网膜铺片出生后第1 7 d的正常组小鼠( 5 只) 及模型鼠( 5 只) 腹腔内注射麻醉剂1 ％ 戊巴比妥钠( 3 0 m g ／k g )后， 打开胸腔， 抽取配置F I T C — D e x t r a n( 5 0 ra g ： l m L 4 ％ 多聚甲醛) 0 ． 5 m L ， 用l m L注射器灌注左心室后， 迅速摘除眼球， 显微镜下视网膜铺片， 荧光显微镜下观察视网膜血管结构。

    1 ． 2 ． 3 视网膜新生血管内皮细胞核计数

    过量麻醉处死出生后第1 7 d 的正常组小鼠( 5 只) 及模型鼠( 5 只) 后， 摘除眼球并固定、脱水、浸蜡包埋， 通过角膜平行视神经做眼球矢状位系列切片( 6 tx m ) ， 含视神经的切片除外。显微镜下计数突破内界膜的血管内皮数， 每只眼随机抽取5 张切片( 每隔6 0 ¨ m 取1 张) ， 取平均内皮细胞数用于统
计分析。

    1 ． 2 ． 4 R T ． P C R 检测N e t r i n — l m R N A 表达水平提取出生后第1 2 、1 4 、1 7 d 正常组小鼠( 共15 只) 及模型鼠( 共1 5 只) 视网膜总R N A ， 采用R T — P C R 检测视网膜组织中N e t r i n — l m R N A 的表达水平。

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