( 1 ) 视网膜总R N A 提取：根据T r i z o l 总R N A 提取说明书提取视网膜总R N A 。( 2 ) 逆转录反应：c D N A 第一链的合成按照R e v e r t A i d”c D N A 第一链合成试剂盒说明书进行。产物放人一2 0 ℃ 备用。( 3 ) 合酶链反应：N e t r i n 一1 引物序列： 上游5 ’一G C CT T C C T C A C C G A C C T C A 一3’， 下游5 ’
． G C C T C C T G C T C G T T C T G T T 一3 ’；B — a c t i n 弓I物序歹0 ：上游5’一C G T T G A C A T C C G T A A A G A C 一3 ’， 下游5 ’一T G G A A G G T G G A C A G T G A G ． 3 ’；反应条件：9 4℃ 预变性5 ra i n ， 然后9 4 ℃ 3 0 S ， 5 5 ℃ 4 0 s， 7 2 ℃ 4 5 S ， 共3 6 个循环， 最后7 2 0C 延伸1 0 m i n 。取5 灿L P C R 产物于1 ． 5 ％琼脂糖凝胶上进行电泳， 同时以D N A m a r k e r 为分子量标准。凝胶成像系统观察并照相。使用G e l a n a l y z e r软件测定各泳道扩增产物的灰度值。结果以N e t r i n 一1与内参照3 - a e t i n m R N A 扩增产物的灰度相对比值表示。

    1 ． 3 统计学方法

    采用S P S S 1 1 ． 0 统计学软件对数据进行分析。两组间视网膜中N e t r i n 一1 m R N A 表达水平的比较采用独立样本的t 检验， P < 0 ． 0 5 为差异有统计学意义。

    2 结果

    2 ． 1 荧光素心脏血管造影视网膜铺片观察视网膜血管形态正常出生第1 7 d 小鼠视网膜铺片可见整个视网

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