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1.2方法 采用空气栓塞法处死家兔，剜出眼球，置于750mL/L乙醇中浸泡20min。然后将眼球取出到超净工作台中,用DHankes液清洗3遍后在培养皿中解剖分离出晶状体赤道部上皮组织，剪碎成3mm×3mm大小，置入培养瓶中。用组织块法原代培养兔眼LEC，用含200g/L FCS的DMEM培养液培养，3d换液，于37℃，50mL/L CO2的培养箱中培养25d左右，细胞覆盖瓶底接近80%时，用胰蛋白酶消化，计数，转入置好玻片的六孔培养板中，分组培养(对照组与10，1.0，0.1mg/L 3个浓度组)。每组设复孔10个。
1.2.1培养上清液中TGFβ1浓度的检测 各孔在取出细胞爬片时吸取培养液，4℃，2000r/min，离心20min。严格按照ELISA试剂盒说明书上的步骤进行试验操作，测A值，制作标准曲线，算得各个样本的TGFβ1浓度。然后根据（各样品TGFβ1浓度值×2mL/各孔细胞数）×1×106，得出各孔样品平均每100万个细胞所对应的TGFβ1的量（ag/细胞）。
1.2.2染色 对每张细胞爬片进行苏木精核染和SP染色，一抗以1∶100稀释，操作步骤按免疫细胞化学SP法说明书进行，细胞质染成黄色或棕黄色的为阳性细胞。每张爬片在计算机图像分析系统上随机采取图片20张（显微镜下放大200倍），采用软件ImagePro Plus 5.0分析阳性着色强度的平均吸光度（A），求出平均值。
统计学分析：应用SPSS 10.0软件，数据以均数±标准差（ ±s）表示，采用单因素方差分析q检验法(StudentNewmanKeuls法)，直线回归和Pearson直线相关分析，P<0.05，为差异有统计学意义。
2结果
2.1 TGFβ1活性浓度和αSMA表达 Decorin 3种浓度组的TGFβ1水平和αSMA表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01），说明decorin能够抑制细胞活性TGFβ1的量，同时也能抑制细胞表达αSMA，而且随着药物浓度的增加，表达量逐渐降低。而且，10和1.0mg/L decorin抑制细胞活性TGFβ1和抑制细胞表达αSMA的作用都要比0.1mg/L的decorin的作用强（P<0.05,表1），但前二者的抑制作用是等效的，差异没有统计学意义（P>0.05）。另，转板培养6d时，测得TGFβ1浓度和αSMA表达量分别为99.0±16.1ag/细胞和0.0095±0.0014，10mg/L的decorin浓度组与其比较，差异没有统计学意义（P=0.140，P=0.703）；1.0mg/L的decorin浓度组与其比较，差异没有统计学意义（P=0.317，P=0.672）。可见一定浓度的decorin能够保持体外培养的细胞处在原来状态，抑制其分化。TGFβ1分泌量与αSMA表达量相关：Y=0.0003X0.0142 (t=17.460,P<0.01)，Pearson直线相关分析，得r=0.995,P<0.01，两者高度正相关。说明两者存在着相互依存关系，αSMA的水平随着TGFβ1的变化而变化。
2.2免疫细胞化学观察 有αSMA表达的细胞肥大，细胞质呈棕色。比较对照组与其他各组的阳性染色程度，存在着明显的差异（图1）。
3讨论
后发性白内障是指白内障囊外摘除术后晶状体后囊再次发生混浊，是目前白内障手术后最常见的并发症之一[3,4],亦是白内障术后视力下降的主要原因[5]。PCO的主要发生机制是残留的前囊膜下和赤道部的晶状体上皮细胞迁移，增殖及转化或上皮间质转分化（epithelialmesenchymal transdifferentiation,EMT）致使后囊膜混浊[6,7]。EMT是上皮源性细胞在某种特定条件下发生迁移、变形、增生并转化为表达平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin,SMA）等间充质来源细胞类型的现象，从而参与了胚胎发育早期、创伤修复、免疫调节、肿瘤的发生等多种生物过程。研究发现，TGFβ1抑制了LEC的增生，限制了细胞周期的正常进程，细胞处于异常增生的状态，显著下调了LEC的缝隙连接蛋白43的表达，促进了细胞外基质FN和整合素β的过度表达，促使LEC向间质转分化，诱导LEC异常表达α平滑肌肌动蛋白（αSMA），正常情况下αSMA不在LEC上表达，它是肌成纤维细胞最特异性标志,能增加细胞的收缩性，致使后囊膜皱缩而混浊[8]，参与了PCO的形成过程。正常情况下TGFβ1在房水、晶状体和玻璃体中均有表达，通常以无活性的复合物形式存在，免疫、创伤和手术等能促使其激活，释放出大量成熟的TGFβ1，从而诱导细胞的异常增生和分化[9]。核心蛋白多糖是一种小分子的硫酸软骨素类蛋白多糖，由富含亮氨酸的核心蛋白和一条糖胺聚糖链组成，存在于几乎所有细胞外基质中，通过拮抗活性TGFβ1来调控细胞的迁移，增殖及分化[2]。本研究通过原代培养兔晶状体上皮细胞，观察不同的培养时间和不同浓度的decorin作用时TGFβ1的水平变化和LEC异常表达αSMA的水平变化，探讨decorin抑制兔晶状体上皮细胞转分化的作用。在本研究中，原代培养的LEC类似白内障手术后残留的LEC，受到损伤刺激后不断以自分泌和旁分泌的方式大量分泌TGFβ1。研究表明随着时间的延长，其分泌量增多，而且细胞表达αSMA的量也随着增多，说明LEC在TGFβ1的不断作用下逐渐发生了上皮间质转分化（EMT）[10]。本研究表明，随着decorin浓度的增大，αSMA的表达量也相应减少，10和1.0mg/L的浓度能使体外培养的LEC细胞TGFβ1的分泌量和αSMA在细胞中的表达水平处于培养后6d的水平，说明decorin通过抑制TGFβ1的分泌和拮抗TGFβ1的活性[11]，下调αSMA在细胞中的表达，阻碍其进一步分化。decorin除了能够调控细胞的分化外，还能影响细胞外基质蛋白的形成和聚集[10]。
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