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Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和细胞周期的影响
丁小燕， 李 涛， 谢素贞， 马红婕， 李 斌， 唐仕波
广州中山大学中山眼科中心 510060
目的：体外培养并鉴定人类视网膜微血管内皮细胞（HRCECs），并探讨Norrin基因高表达后对HRCECs增殖和细胞周期的影响。
方法：体外分离、培养并鉴定人类视网膜微血管内皮细胞，抗第Ⅷ因子相关抗原抗体及透射电镜观察W-P小体鉴定细胞。利用脂质体Lipofectimine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs，RT－PCR、免疫组化和Western－Blot方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力，流式细胞术分析其细胞周期变化。
结果：所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性，透射电镜下见特征性的W－P小体。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后24小时，RT－PCR显示质粒转染组Norrin表达水平较阴性对照组升高，P值为0.009。转染后48小时免疫组化及Western－Blot均显示质粒转染组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖较对照组高，细胞周期检测示质粒转染组G2期细胞较阴性对照组高，P值均为 0.001。
结论：脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs) 的增殖、并促进细胞DNA合成，使细胞周期由G0期向G2期。提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。
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