基础 1497 PO0128
钙离子对缺氧人视网膜色素上皮细胞表达VEGF的作用
朱 洁、王雨生、张 鹏、张自峰
第四军医大学西京医院眼科 全军眼科研究所 710032
目的 VEGF受缺氧调节的特性使其成为最重要的促新生血管形成因子，参与缺氧诱导的眼内新生血管形成。但缺氧上调视网膜色素上皮(retina pigment epithelium，RPE)细胞VEGF表达的信号转导机制尚不完全清楚。Ca2＋作为一种信使分子，广泛参与细胞信息传递、分泌、细胞增生及分化等一系列与生命现象密切相关的过程。有研究发现，Ca2＋信号参与了细胞对缺氧的应答。本研究运用钙离子载体A23187及胞内Ca2＋螯合剂BAPTA-AM探讨Ca2＋信号转导通路在缺氧诱导RPE细胞表达VEGF中的作用。
方法 200µM氯化钴(Cobalt Chloride，CoCl2)建立培养人RPE细胞化学缺氧模型。将5µM的Ca2＋载体A23187及10µM的胞内Ca2＋螯合剂BAPTA-AM分别作用人RPE细胞，在常氧及缺氧状态下培养。于15min、30min、1h、2h，激光共聚焦显微镜观察并记录RPE细胞[Ca2+]i变化。于0.5、1、2、4、6、8、16和24h，ELISA法检测RPE细胞培养上清内VEGF含量的变化，t检验比较各组之间的差别。
结果 缺氧及Ca2＋载体A23187均可使RPE细胞[Ca2+]i迅速升高，胞内Ca2＋螯合剂BAPTA-AM可以抑制缺氧状态下RPE细胞[Ca2+]i的升高。体外培养的人RPE细胞在常氧状态下表达少量的VEGF。缺氧可显著上调RPE细胞VEGF的表达(P<0.01)，在缺氧24h时内培养上清中VEGF含量持续升高。Ca2＋载体A23187促进缺氧状态下RPE细胞VEGF的表达(P<0.01)，而胞内Ca2＋螯合剂BAPTA-AM可抑制缺氧状态下RPE细胞VEGF的表达(P<0.01)。
结论 A23187是一种Ca2+载体，协助Ca2+的跨膜转运，可以使[Ca2+]i迅速升高。5μM A23187作用于RPE后，出现类似于细胞缺氧诱导的VEGF表达升高等变化。较之缺氧，VEGF的高表达出现的更为迅速、直接，在时相上较缺氧组出现的更早。BAPTA-AM是一种胞内Ca2+螯合剂，因带有-AM酯基易于穿过胞膜进入胞内，特异地与胞内游离Ca2+螯合，使其不能发挥信使作用。10μM BAPTA-AM预处理RPE，可以显著抑制缺氧导致的VEGF的高表达。由此可以证实，Ca2+参与了缺氧诱导的人RPE细胞分泌产生VEGF蛋白的过程。
声明:本站独家报道，转载须标明来源“中华眼科在线” |
