基础             2653                                      PO0158

    Müller细胞中HTLV-Ⅰ病毒Tax蛋白表达及效应分析

    罗琳 吴开力 潘竹娟 黄强

    广州中山眼科中心 510060

    目的 观察HTLV-1病毒Tax蛋白对Müller细胞生长的影响及寻找Tax蛋白的结合和/或效应靶蛋白分子。

    方法 重组质粒pc-Tax质粒转染Müller细胞后，倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化；MTT法检测细胞活力；流式细胞仪分析Müller细胞周期变化；细胞免疫化学（光镜及激光共聚焦显微镜观察）及免疫印迹法检测Müller细胞内Tax蛋白的表达。利用蛋白-蛋白反应，以差异蛋白质组学方法和生物信息学对细胞外GST-Tax融合蛋白和Müller细胞提取蛋白结合蛋白进行分析，经与对照样本比较，分离鉴定出候选靶蛋白分子并进一步验证。

    结果 重组质粒pc-Tax转染Müller细胞后，细胞生长活力较对照组受抑制；细胞周期分析见S期增多，G2期减少；免疫染色见细胞中有Tax蛋白表达，呈阳性棕色反应（DAB染色）或绿色荧光（荧光染色），表达仅位于Müller细胞胞浆内；比较蛋白质组学分析找到10个差异蛋白质，为Tax候选靶蛋白，并初步证实Tax蛋白能与ENO1相结合。

    结论 HTLV-1病毒Tax蛋白在Müller细胞中的表达能抑制细胞生长，可能通过多个靶分子发挥作用

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