青光眼             1102                                      PO0450

　　大鼠结膜囊成纤维细胞TGFβ2特异性siRNA的筛选及其载体构建的研究

　　马建民1    赵家良2   卞爱琳2    程刚炜2   张文宝2    张华2

　　北京同仁眼科中心  100730

　　目的  筛选大鼠结膜囊成纤维细胞TGFβ2特异性siRNAs，并构建其载体，为今后研究其对大鼠结膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用奠定基础。

　　方法  在Genbank中，查找大鼠TGFβ2  mRNA序列。按照RNAi的设计原则，利用Ambion公司提供的软件，使用Finder程序查找和设计4对正义及反义寡核苷酸链（即 L1，L2，L3，L 4）并使用BLAST软件对其同源性进行检测。采用体外转录法合成4个TGFβ2  siRNAs，分别转染体外培养的大鼠Tenon’s囊成纤维细胞，以未转染细胞作为空白对照，转染后48小时采用RT－PCR技术检测所合成的siRNAs对TGFβ2 mRNA表达的干扰作用；在此基础上，采用pSilencer™ 3.1-H1 质粒作为载体，构建有干扰作用siRNA的特异性载体，并采用酶切和测序法对构建载体的正确性进行检验。

　　结果  转染后48小时，L1，L2，L3，L 4  4条链与空白对照组相比，有一条TGFβ2 siRNA链（L 4）能够使大鼠Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2的mRNA表达水平明显下调，其余3条TGFβ2  siRNAs链未产生明显的干扰效果。经过酶切和测序检测证明成功构建了有干扰效果TGFβ2 siRNA的载体。

　　结论  不同的TGFβ2  siRNA对大鼠Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2mRNA表达具有不同的干扰效能；能够构建有干扰效能的TGFβ2 siRNA特异性载体。

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