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3.3低温保存角膜的冷冻保护剂 低温保存技术是一种长期保存角膜的方法，为减少低温冷冻对细胞的损伤，需加入各种冷冻保护剂。常用的的冷冻保护剂可分为渗透性和非渗透性两种，前者主要有甘油、二甲基亚砜、丙二醇、乙二醇等，后者主要有聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、葡聚糖、羟乙基淀粉、TRH等。TRH是一种非还原性二糖，具有保护生物细胞和活性物质在脱水、干旱、高温、冷冻、高渗透压及有毒试剂等不良环境条件下活性免遭破坏的功能。TRH在低温保存中的作用如下:使细胞脱水，因此在冷冻前降低细胞的水含量;通过脱水，避免洗脱渗透性冷冻保护剂时细胞过度肿胀和渗透休克;在冷冻和干燥过程中，有助于稳定细胞膜和蛋白质的作用[15、16]。水含量高时，作用机制为TRH的排除作用，即优先与蛋白质表面接触，使原结构保持稳定[17]。TRH具有极好的玻璃化能力[18]，其玻璃化转化温度也高于麦芽糖、蔗糖和葡萄糖。低温保存过程中，在二甲亚砜（DMSO）中加入蔗糖和TRH，能大大提高细胞的成活率，而且TRH的保护作用好于蔗糖[19];例如在胚胎干细胞的低温保存过程中，在含DMSO的冷冻保护剂处理之前，先用TRH处理，将会进一步提高细胞的活性[20]。TRH在肺、气管、皮肤、肾脏、红细胞、血小板等组织细胞的低温保存方面也显示提高了保存组织细胞的活性[21，22]。由于TRH对组织细胞的低温保存具有保护作用，其也被应用到角膜的低温保存研究中，Wusteman等[23]采用丙二醇联合TRH玻璃化法保存角膜也取得了较大进展。他们首先在梯度降温（0℃～20℃）下采用四步梯度导入法将丙二醇、TRH导入角膜组织，四步梯度导入过程中，TRH的浓度始终为150g/L，丙二醇的浓度分别为100，200，300，400g/L；然后转入175℃液氮中冷冻保存2wk；37℃水浴复温后转为室温下，采用五步梯度洗脱程序导出冷冻保护剂。角膜内皮经吖啶橙/碘化吡啶染色，荧光显微镜下观察，角膜内皮细胞活性率在95%以上。使用差示扫描量热仪观察，在冷冻过程中，没有冰晶形成，在复温过程中，没有脱玻璃化现象发生。显示了TRH在角膜玻璃化冷冻保存中的保护作用。
总之，具有独特生物特性的TRH在食品、医药领域的研究及应用已非常广泛。在眼科领域的研究尚处于基础研究阶段，国内尚未见相关报道。随着对TRH药理作用及其作用机制的深入研究，TRH在眼科领域的研究也会不断扩展，有可能在眼液制剂、干眼症治疗、角膜保存等方面具有广泛的应用前景。
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