【摘要】目的：探讨胸腺肽（thymosin）治疗复发性单纯疱疹性病毒性角膜炎外周血T淋巴细胞亚群。方法：收集复发性单纯疱疹病毒性角膜炎患者33例、健康对照者28例，应用流式细胞仪技术测定T细胞亚群。结果：复发性单纯疱疹病毒性角膜炎患者治疗前CD3、CD4明显下降（P<0.05），CD8升高，CD4/CD8比值下降（P<0.05）。23例痊愈患者治疗后T淋巴细胞亚群接近正常水平，而6例未痊愈患者治疗后T淋巴细胞亚群虽有所提高，但仍低于健康对照（P<0.05）。结论：复发性单纯疱疹病毒性角膜炎患者细胞免疫功能降低，胸腺肽肠溶片能够增强患者细胞免疫功能，取得较好效果。
【关键词】 单纯疱疹病毒性角膜炎；T细胞亚群；胸腺肽
Effect of thymosin on herpes simplex keratitis and the change of T lymphocytes subgroup in peripheral blood
JingKun Liu, Bing Wang
1Department of Ophthalmology, Xian Red Cross Hospital, Xian 710054, Shaanxi Province, China; 2Shaanxi Health Inspection office, Xian 710054, Shaanxi Province, China
Correspondence to: JingKun Liu. Department of Ophthalmol, Xian Red Cross Hospital, Xian 710054, Shaanxi Province, China. [email protected]
AbstractAIM: To explore the effect of thymosin on cytoimmunity of herpes simplex keratitis (HSK) and the change of T lymphocytes subgroup in peripheral blood.METHODS: Thirtythree cases of recurrent HSK and 28 cases of healthy controls were collected. The levels of CD3, CD4, and CD8 were detected by using flow cytometry technology.RESULTS: Before the treatment, CD3, CD4, CD4/CD8 of the recurrent HSK patients decreased (P<0.05), while the level of CD8 rose. After the treatment, T lymphocytes subgroup approached to the normal level in 23 cases who had complete recovery. The level of T lymphocytes subgroup were raised to some extent but still lower than that of normal controls in six cases who did not recover completely. CONCLUSION: Cellmediated immunity decreased in patients with recurrent herpes simplex keratitis. Thymosin can improve the curative effects on recurrent HSK and enhance the cytoimmunity of HSK patients.
KEYWORDS: herpes simplex;T cell subgroup; thymosin
引言
单纯疱疹性病毒性角膜炎（herpes simplex keratitis,HSK）是由单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus,HSVⅠ）引起的一种致盲性疾病，其中的复发性HSK反复发作，缠绵难愈、治疗棘手，已成为眼科临床重点研究、探讨的课题之一。HSK是感染性免疫性疾病[1]。许多研究发现免疫反应在HSK的发生、复发过程有十分重要作用[2]。胸腺肽肠溶片（西安迪赛生物药业有限公司）能调节机体免疫功能。我们对33例HSK患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测，并观察胸腺肽肠溶片对其治疗作用。
1对象和方法
1.1对象
HSK患者33例均来自本院门诊，均为复发患者，依照Liesegeng[3]分类法进行分类。其中男10例，女23例；平均年龄33.24±10.21，其中角膜上皮炎28例（浅层点状角膜炎15例，树枝状角膜炎8例，地图状角膜炎5例），角膜基质炎3例，角膜内皮炎合并虹膜炎2例。收集28位健康人作对照，并排除眼病史者。男15例，女13例，平均年龄31.22± 12.34,两组人在性别（χ2=0.76,P>0.05）和平均年龄（t=1.02,P>0.05）均无显著性差异。
1.2方法
所有患者口服胸腺肽肠溶片，3次/d，每次10mg，连用30d，抽取患者及健康者外周静脉血3mL，加肝素（20U/mL）抗凝，用淋巴细胞分离液制备淋巴细胞悬液，采用间接免疫荧光染色后再用流式细胞仪检测法检测T细胞亚群。取已制备的淋巴悬液各100μL,分别加入1∶100稀释的抗CD3+、CD4+、CD8+单克隆抗体即OKT3、OKT4、OKT8、单克隆抗体（美国BectonDickinson公司生产）100μL，室温孵育30min,加入1∶200稀释的二抗（羊抗鼠IgFITC）100μL室温孵育30min，最后加PBS液2mL上机检测。试验中用PBS液分别代替一抗、二抗作阴性对照。每份样本检测10000个细胞计数荧光标记阳性的细胞，流式细胞仪检测。采用流式细胞仪分析所有的患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群，并以28位健康献血者组对照。
统计学处理：所有数据输入计算机内，应用SPSS10.0进行统计计算。计量资料以均值±标准差（±s）,并用t检验。
2结果
疗程结束后即抽外周血复查T淋巴细胞亚群，并随访3mo，其中未复发23例，复发6例，失访4例。HSK患者与健康对照组外周血T淋巴细胞亚群比较（表1）。HSK患者治疗前、后T淋巴细胞亚群检测（表2）。表1HSK患者与健康对照组外周血T淋巴细胞亚群比较（略）表2HSK患者治疗前、后T淋巴细胞亚群检测（略）
3讨论
HSV对人的感染性很强，潜伏期为2～12d，HSV可终身潜伏在三叉神经节的感觉神经元中，在一些非特异刺激（感冒、发热、月经、日晒、外伤、精神刺激）条件下诱发。HSV可直接感染角膜上皮细胞，在细胞内增殖导致细胞变性、坏死、脱落、形成上皮缺损，呈典型的树枝状角膜炎，如进一步扩大加深，则形成地图状角膜炎，此称为浅层发病。深层发病并非HSV的持续性增殖，而主要是一种宿主对HSV抗原以细胞为主的迟发性超敏反应。HSV由上皮或内皮进入角膜实质后，炎性细胞、抗原抗体复合物或角膜实质内不断繁殖的病毒致胶原板层溶解，产生不同类型的深层炎症。HSK是当今世界上危害严重的眼部感染性疾病，发病率占角膜病的首位[4]。其特点是多类型、易复发、发病机制与免疫状态有关。
机体T淋巴细胞参与细胞免疫，根据其细胞膜表面糖蛋白（抗原）的不同，可将其分为若干亚群，不同亚群生物学类型不同。其中CD3反映外周血T细胞总数，CD4反映T辅助细胞，CD8反映T抑制细胞，CD4/CD8被称为免疫调节指数，在一定程度上反映了机体的细胞免疫状态。本研究表明，HSK患者存在着一定的细胞免疫功能异常。在HSK发病过程中，T细胞和NK细胞均参与其发病。T细胞具有启动局部免疫反应，引起组织损伤的作用[5,6]，Hendricks等[6]证明在无胸腺（无T细胞）裸鼠中不会感染HSK；当裸鼠获得T细胞后，即可出现HSK，调节炎症反应的主要是细胞亚群CD4细胞。
Verjans等[7]研究表明不论是浅层角膜炎患者或是深层角膜炎患者均存在有细胞免疫功能的低下[8,9]。自Goldstein等从小牛胸腺肽中分离出一组多肽物质并命名为胸腺素以来，通过进一步纯化获得具有调节T淋巴细胞的胸腺素组5（TF5）,该组分能使淋巴细胞产生IL2等多种活性物质，增强mIL2R表达，与IFNrβ协同激活NK细胞活性，对人体外周血淋巴细胞增殖有刺激作用，促进其分化成熟为具有免疫功能的T细胞[10]。本文用胸腺肽治疗HSK患者，随访3mo，未再复发23例，再次复发6例，失访4例。未再次复发者CD3，CD4，CD4/CD8比值在治疗后明显增高，CD8则明显降低（P<0.05),表明经胸腺肽片剂治疗后患者免疫细胞功能提高。而6例复发者CD3、CD4、CD4/CD8比值在治疗后虽有变化，但无统计学意义（P>0.05），可能与个体免疫状态特异性有关，有待于进一步研究。
胸腺肽是小牛胸腺提取物，无种属特异性，对T淋巴细胞亚群的异常具有双向的调节作用。除促进淋巴细胞在胸腺内增殖和成熟而调节细胞免疫功能外，它还能促进淋巴细胞分泌白细胞介素2（interleukin2,IL2）和干扰素（Interferon）a、β、r，增加自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）数量和活性，以增强机体免疫功能，达到抗病毒感染的作用，以往均使用注射针剂，胸腺肽肠溶片同针剂相比既方便又安全，疗效可，且减少患者的痛苦，值得临床推广。
【参考文献】
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