1．2基因组DNA的提取征得患者及其家属知情同意和医院伦理委员会的批准后，分别抽取家系成员中的8例患者和48名健康者静脉血5ml。应用wi脚d删试剂盒(美国Promega公司)提取基因组DNA，一20％保存。
1．3候选基因突变位点的检测根据已报道的中国家系致病基因突变位点(9个基因的16个突变位点)，应用Primer Premier 5．0软件设计11对引物(表1)。引物由上海英骏公司合成。PCR反应体系为25一，含10 X PCR缓冲液2山，25 mmoVL Mgcl21．6一，2mmoL／L dNllP 1．2山，10 oanmoL／L正反向引物各0．8山，0．5U／山Taq DNA聚合酶2一，20ng／一基因组DNA 2山，双蒸H2 O 10．4山。上述试剂购自QIAGEN公司。PCR反应程序采用手工热启动以及逐步降温PCR技术。PCR产物经电泳检测后，通过ABl3130 DNA测序仪测序。

1．4微卫星分子标记连锁分析

1．4．1微卫星分子标记的选择根据已报道的17个ADCC候选基因和13个染色体区域，选取物理距离与上述位点紧密连锁的27个微卫星分子标记(有作适当调整，5 u／山热启动Taq DNA聚合酶0．1斗l，20 ng／“基因组DNAI山，添加双蒸H20至10 m。上述试剂均购自QIAGEN公司。PCR反应程序为95℃预变性15min，第1相循环：94℃308，起始退火温度63℃90 s，以后每个循环下降0．50C，72℃60 s，共16个循环；第2相循环：89。C 30s，550C 90s，72℃60 S，共20个循环，最后60℃延伸30min。其中第1相循环的起始退火温度和循环数根据扩增效率不同标记作适当调整。

1．4．3 基因型分析PCR产物经ABl3130自动测序仪毛细管电泳(5％变性聚丙烯胺凝胶分离)，使用ABI ROXS00标准样品测量各等位基因片段的大小，应用GeneSean 3．0和Genotyper 2．1软件进行数据
收集和基因分型。

1．4．4连锁分析根据每个微卫星标记在家系成员中的基因分型结果。应用LINKAGE 5．2软件中的MLINK进行微卫星标记与候选基因和位点两点间的连锁分析，计算优势对数值(109 of the odd ratio，LOD)。

2结果

2．1候选基因突变位点的检测将家系中ADCC患者与正常成员的11个PCR产物DNA测序结果作比对，仅发现2个单核苷酸多态性(SNP)，但不影响氨基酸编码，故将其排除。即在所测序的DNA片段上未发现突变位点，排除了已报道的中国家系致病基因突变位点(9个基因的16个突变位点)。

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