作者：郭瑶，陈 蕾，王敏芳，柳力敏
作者单位：1（110001）中国辽宁省沈阳市，中国医科大学附属第一医院眼底病中心;2(110031)中国辽宁省沈阳市眼病研究所
【摘要】 目的：视神经损伤是以视网膜神经节细胞的轴突损害为主要特征，所以研究缺血性视神经病变模型以抑制视神经节细胞损伤对于人类治疗致盲性眼病具有重大意义。
方法：大鼠60只，双眼分别为孟加拉玫瑰红注射实验组、孟加拉玫瑰红注射+激光实验组、激光实验组和空白对照组，用25g/L乌拉坦10mL/kg麻醉，ip。
结果：用孟加拉玫瑰红尾部注射和单纯激光的方法均不能产生视网膜缺血。用孟加拉玫瑰红诱导后，用激光的方法可以成功制作缺血性视神经病变模型，并在闪光VEP、视网膜血液供应、光镜、电镜、定量观察等方面都有相应的改变。
结论：用孟加拉玫瑰红诱导激光可成功制作缺血性视神经病变模型
【关键词】 孟加拉玫瑰红；缺血性视神经病变；VEP；激光；大鼠
Laser irradiation can successfully set up ischemic optic neuropathy models in Wister rats after induction with Bangladesh Rose
Yao Guo1, Lei Chen1, Min-Fang Wang2, Li-Min Liu1
1 Ocular Fundus Disease Center, the Affiliated First Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China;2 Eye Disease Institute of Shenyang City, Shenyang 110031, Liaoning Province, China
Abstract AIM: To set up the animal models of ischemic optic neuropathy (ION) induced by Rose Bengale to find out a way inhibiting the impairments to retinal gangliocytes for the treatment of human ophthalmopathy.METHODS: Sixty Wistar rats were used for the establishment animal model and they were randomly divided into 4 groups: the Rose Bengale injected group, the combined treated group with Rose Bengale and laser, the laser treated group and the control group. Animals were anaesthetized by celiac injection with urethane 10mL/kg. RESULTS: ION model could not be set up simply by Rose Bengale injection or laser treatment. The ION model was successfully established by laser treatment after the inducement with Rose Bengale, and the pathological changes could be seen in many aspects and ways such as flash VEP, blood supply, optical microscope, electrical microscope and quantification. CONCLUSION: The ION animal model can be successfully established by the combined treatment with Rose Bengale and laser.
· KEYWORDS: Rose Bengale; ischemic optic neuropathy (ION); VEP; laser; rats
0引言
近年来，很多人注意到由于视神经前端的小血管循环障碍，发生局部缺氧而致组织水肿时，眼底可以出现视乳头水肿，过去将这种情况误认为是视乳头炎，或是脑肿瘤所致，现在认识到它是一个独特的疾病，称为缺血性视神经病变(ischemic optic neuropathy, ION)。该病是常见的急性血管性视神经病变，多见于年龄稍长者，可出现突然视力障碍。目前有年轻化的趋势。由于视神经损伤是以视网膜神经节细胞的轴突损害为主要特征，所以研究抑制视神经节细胞损伤对于人类治疗致盲性眼病具有重大意义。近年来国内外学者就视神经的再生做了很多基础研究，然而目前临床上尚缺乏使视神经再生的有效方法,如何抑制视神经损伤及使损伤后的视神经在结构与功能上再生修复，并实现形态认知等高层次视功能的重建，既是神经科学领域研究的新课题，又是临床研究的难题。
1材料和方法
1.1材料 Wistar大鼠60只，雌雄不限，清洁级，由中国医科大学实验动物中心提供：毛发色泽光亮，无脱毛，四肢和尾部无残缺，颈软无歪斜；双侧眼球等大，眼睑完整，睫毛整齐，角膜透明，双瞳孔等大等圆，虹膜血管清晰，散瞳查眼底双眼对称，无视神经萎缩，血晕良好。所有大鼠 置于同一鼠舍，温度控制在10~20℃。鼠舍每晨06∶00开灯，下午18∶00点熄灭，使大鼠保持自然生物节律。 孟加拉玫瑰红 （RB）纯度90% ，（美国sigma公司）；Coherent 多波长氪离子激光（美国）；VETS-3电生理机； SZXIZ 照相（OLYMPUS 日本）。
1.2方法 大鼠双眼分别为孟加拉玫瑰红注射2.5mmoL/(mL·kg)实验组、孟加拉玫瑰红注射+激光75mmoL，20s实验组、激光实验组和空白对照组，用25g/L乌拉坦10mL/kg，ip。将大鼠在不同时间段分别用ip过量麻药处死，即刻摘除眼球。40g/L多聚甲醛固定30min，各浓度酒精浸泡2min脱水；二甲苯I、II 各2min透明。石蜡包埋，沿视神经矢状轴前后方位视网膜全层切片，厚5μm，HE染色，中性树胶封片。另处死即刻摘除眼球后，在显微镜下取出视网膜放入25g/L戊二醛溶液内固定。应用美国Image Proplus专业图像分析软件系统测量距视盘边缘100μm长度内视网膜内层厚度（指视网膜内界膜到外丛状层内缘的距离）。每只眼球取3张切片进行分析。同样方法在视网膜切片上计数100μm内神经节细胞层神经节细胞（RGC）数量，每只眼球取3张切片进行分析。视网膜打墨观察正常和和孟加拉玫瑰红诱导激光30min后分别于左心室注入墨汁5mL，此时大鼠心脏、全身、耳部及眼球迅速变为黑色，迅速处死动物并取出眼球，剪除角膜，去除晶状体、玻璃体，置于显微镜下观察。闪光VEP观察大鼠经激光后0，1，3，5，7d观察。麻醉后散瞳，未检查眼用不透光黑布遮盖避光。刺激器采用全视野闪光刺激。分别安放记录电极、参考电极和接地电极于枕骨粗隆突上、前额、耳部，记录电极和参考电极，电极为银-绿化阴皮肤接触电极，电极尽量与大鼠最大面积接触，电极线固定，参考电极置于。操作时白光闪耀，大鼠置于闪光刺激器内，刺激频率为2Hz，1.95cd/m2,每个时间点至少测量3次。
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