姚志斌   俞鸿   沙倩   呼建文   李京丽   张劲松

中国医科大学附属第四医院   中国医科大学眼科医院   辽宁省晶状体学重点实验室   上海众信生物技术有限公司   中国医科大学盛京医院   上海生命科学院新生命生物科技有限公司   北京蛋白质研究中心   110005

目的：检测人正常水溶性晶状体蛋白质种类和运用基因本体论（Gene Ontology，GO）进行功能分析。

方法：将人正常晶状体加入Tris-HCL缓冲液、0.01%DTT匀浆，离心，收集上清液为晶状体水溶性蛋白质成分，再通过1D SDS-PAGE-液相色谱-线性离子阱串联质谱法进行蛋白质鉴定，对鉴定出的蛋白质进行GO的富集和缺失分析。

结果：鉴定出人正常水溶性晶状体蛋白质628个，包括许多低丰度蛋白质和酶类等重要的功能性蛋白。鉴定出的晶状体蛋白质有15项功能表达是独立于人体总的蛋白功能大背景之上而为其特定表达。鉴定出的晶状体蛋白质参与细胞组成显示富集结果有：细胞质，细胞骨架，眼晶状体结构组成；参与分子功能显示富集结果有：催化活性，氧化还原酶活性，异构酶活性，结构分子活性；参与生物过程显示富集结果有：细胞骨架结构和生物合成，糖酵解，戊糖磷酸旁路，烟酰胺代谢过程，吡啶核苷酸代谢过程，以微管为基础的过程，NADPH再生，NADP代谢过程。本次研究数据未显示缺失的注释。

结论：本研究通过1D SDS-PAGE-液相色谱-线性离子阱串联质谱法构建了人正常水溶性晶状体蛋白质数据库，并进行晶状体蛋白质独特功能分析，这些结果为进一步研究晶状体的发育和疾病提供了参考。线性离子阱串联质谱仪（LTQ）在蛋白质鉴定方面显示独特的优势，有利于低丰度蛋白的检测。采用基于GO的功能分析方法是对晶状体蛋白质组学研究的有益补充。