作者： 张雄鹰 查国章 武延隽 余平   

    【关键词】  沙眼衣原体

    摘 要  目的:探讨沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平及其意义。方法:用ELISA双抗体夹心法检测沙眼衣原体感染细胞培养上清IL-6水平的变化。结果:沙眼衣原体感染McCoy细胞在沙眼衣原体感染后36h、48h、60h、IL-6分泌量分别为1.3655±0.0046、2.9601±0.0104、4.0408±0.0722，均显著高于相应的对照组（P<0.05），并且随感染时间的延长IL-6分泌水平显著地逐步增高（P<0.05）。结论:沙眼衣原体K血清型感染可诱导McCoy细胞分泌IL-6，并且呈时间依赖性。

    关键词  沙眼衣原体;McCoy细胞;白细胞介素-6

     沙眼衣原体（Ct）的致病机制涉及机体的免疫防御和免疫病理反应，白细胞介素6（IL-6）作为重要的炎症因子和免疫介导因子可能参与沙眼衣原体感染的致病过程。据报道，Ct能诱导体外培养的上皮细胞、人单核细胞、淋巴细胞等多种细胞产生IL-6等细胞因子 ［1，2］ ，而有关沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌细胞因子的报道尚少。本文检测沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌IL-6水平，旨在为寻求衣原体感染性疾病的防治措施及进一步的研究提供参考。

    1 材料

    沙眼衣原体K血清型由中山医科大学宁波教授惠赠，McCoy细胞由湘雅医学院病毒研究室惠赠，IL-6ELISA试剂盒（晶美公司产品），RPMI-1640（GIBCO产品）。

    2 方法

    2.1 衣原体增殖

    取一瓶单层McCoy细胞，弃上清，加1mL衣原体悬液至培养瓶中，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。加无双抗的RPMI-1640培养基（含10%小牛血清、1μg/mL放线菌酮），置37℃、5%CO 2 培养箱培养48h取出，冻融，500g离心10min，取上清（含衣原体），分装于无菌

    小试管，70℃冰箱保存备用。

    2.2 衣原体滴定

    将增殖后的衣原体作系列稀释，接种于已经形成McCoy细胞单层的24孔培养板，培养48h，用荧光标记的抗衣原体单克隆抗体染色后于荧光显微镜下计数感染细胞百分率，并计算ID50值。 2.3. ELISA检测IL-6含量

    在已形成McCoy细胞单层的24孔培养板中接种1ID50衣原体，并设正常细胞对照，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。每孔加含10%小牛血清的RPMI-1640培养基1mL，37℃、5%CO 2 培养箱培养。于36h、48h、60h分别取培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测IL-6含量（按试剂盒使用说明书操作）。在酶标仪上用405nm波长测OD值。将试剂盒提供的IL-6标准浓度与测得的OD值经SPSS统计软件做标准曲线，得出回归方程，根据样本的OD值计算其IL-6含量。

    2.3 统计学处理

    实验结果用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较用单因素方差分析，显著性差异以P<0.05为准。

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