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2结果
2.1 STZ诱导DM小鼠模型的成功建立 DM小鼠造模成功30例，DM组饲养中有2只死亡，16wk后余下8只，DM骨髓治疗组有1只血糖降至正常而放弃，16wk后余下19只。
2.2骨髓细胞回输对糖尿病小鼠OPs振幅及OPs峰潜时的影响 高血糖的影响使得DM小鼠造模成功16wk后OPs波振幅呈明显降低趋势，OPs峰潜时明显延长，与对照组小鼠各时期相比有显著差异(P<0.05，图1 A，B)，26wk及32wk时糖尿病小鼠OPs波幅降低更明显。骨髓治疗2wk和8wk后即小鼠26wk及32wk时，DM骨髓治疗组较DM组OPs波幅明显升高，OPs峰潜时明显缩短,有显著差异(P<0.05，图1 C，D)。而26wk及32wk时NC组及DM骨髓治疗两组OPs振幅及OPs峰潜时相比无显著差异(P>0.05，表1，2)。
2.3视网膜铺片 视网膜铺片正常对照组血管发育成熟，血管网结构清晰，DM对照组可见大量的视网膜新生血管，血管密度较正常组明显增高，血管迂曲阻塞，大量结构异常新生血管，丧失了血管网结构。DM骨髓治疗组(移植后2wk及8wk )的视网膜新生血管显著减少，血管密度均较对照组下降，血管网结构清晰，仍有少部分深层血管阻塞，形态接近正常小鼠(图2AD)[6]。
3讨论
糖尿病视网膜病变(DR)是全球劳动人群中最严重的致盲原因，几乎全部的1型糖尿病和近60% 2型糖尿病患者在20a内发展为DR。越来越多的学者认为，DR是一种慢性的炎症反应[7]，导致血管内皮细胞损伤及VEGF等细胞因子释放所造成的白细胞停滞是微血管无灌注、视网膜缺血的重要因素[8]，从而引起视网膜水肿、出血或纤维血管膜增殖。图1骨髓移植前后小鼠OPs波形变化 A:正常对照组; B：DM对照组;C：骨髓移植后2wk;D：骨髓移植后8wk
图2骨髓移植前后小鼠视网膜铺片联合免疫荧光染色 A:正常对照组;B：DM对照组;C：骨髓移植后2wk;D：骨髓移植后8wk
传统的治疗观念主要是抑制新生血管生成及消融已存在的异常血管，如激光光凝治疗损坏视网膜缺血区，避免视网膜缺血情况加剧。虽然及时适当的视网膜光凝能够有效地阻止患者视力下降，保留中心视力，但与生俱来的破坏性决定其不可避免的要以损毁其周边视力为代价，而且即便接受了光凝治疗，仍然有近5%的患者视力会继续下降[9]。
近年来，许多血管生长抑制剂如血管内皮生长因子抑制因子等在临床试验中被广泛采用，为DR的治疗引入了新的希望。但是，由于刺激细胞因子释放的病因没有从根本上消除，同时由于血管新生因子在促进血管新生的网络型调控的存在，单纯抑制某一细胞因子可能引起其他因子的代偿性功能增强，并不能有效抑制新生血管的形成，而且，还可能引起一些局部乃至全身的并发症，从而限制了这一类药物的应用范围[10]。
随着循环细胞在调节血管内稳态方面的作用日益受到重视，大量关于器官循环重建的研究开始着眼于干细胞输注。骨髓细胞中除造血干细胞外，存在大量的内皮祖细胞、间叶干细胞和多能干细胞，有报道指出这些骨髓来源的干细胞能够分化为血管固有结构细胞如血管内皮细胞、平滑肌细胞及心肌细胞等[11]，修复重建血管机构。另外，骨髓来源的干细胞会产生与血管新生过程中相关的各种血管生长因子如VEGF,bFGF,血小板衍生生长因子(plateletderived growth factor,PDGF),血管生成素(angiopoietin)等，也参与了血管的形成。并且，通过各种各样的实验动物模型，骨髓细胞能够安全地移植到缺血心肌，通过治疗增加缺血心肌的血流量，改善心功能。由这些结果可以发现骨髓细胞是比较安全且容易利用的细胞源。
我们对于治疗新生血管另辟蹊径，旨在改善且稳定组织的缺血缺氧环境，通过骨髓细胞回输重建缺氧视网膜组织的供血功能，重建正常微循环系统。闪光视网膜电图(electroretinogram, ERG)是由光照引起视网膜各种神经元电活动的综合反应，是从视网膜的细胞水平来评价视功能的，其中最敏感、最具意义的是ERG的亚成分视网膜振荡电位(OPs)，糖尿病动物模型中血糖升高后即可观察到OPs的异常，其敏感度超过眼底荧光造影。大量研究表明OPs研究DR最敏感的电生理指标，可以用来评估DR病变的严重程度。我们通过观察糖尿病小鼠ERG中OPs的变化情况反映视网膜病变的视网膜功能变化。同时，采用免疫组织化学技术显示特定的视网膜细胞及血管结构[12]，使得利用诱导成模的糖尿病小鼠来研究DR新生血管测定具有了可定量的最大优点,使结果更具有科学性和可比性。结果发现静脉注射骨髓细胞后，与DM组相比，DM骨髓治疗组小鼠OPs波振幅明显升高，峰潜时明显缩短，视网膜新生血管数量大大降低，接近正常对照组。
我们推测，骨髓细胞的移植回输可以改善微血管循环，降低或阻止微血管细胞的丧失，进一步减少无细胞微血管的形成，修复异常的新生微血管结构，完善微血管网功能，同时，缓解视网膜的炎性状态，减少各种细胞因子的释放，达到治疗DR的目的，但其作用机制还需进一步阐明。骨髓干细胞回输有望成为治疗病理性视网膜血管新生的新的方法，对DR新生血管并发症起防治作用。
【参考文献】
1 Mohamed Q, Gillies MC, Wong TY. Management of diabetic retinopathy:a systematic review. JAMA2007;298(8):902916
2罗丽华，王艳玲.糖尿病视网膜病变的病理改变.临床和实验医学杂志2008;7(6):176177
3陈舒怿，吴强.糖尿病动物模型及其在DR的应用.国际眼科杂志 2008;8(2):355357
4 Hancock HA, Kraft TW. Oscillatory potentials analysis and ERGs of normal and diabetic rats. Invest Ophthalmol Vis Sci2004;45(3):10021008
5 Otani A, Slike BM, Dorrell MI, et al. A fragment of human TrpRS as a potent antagonist of ocular angiogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A 2002;99(1):178183
6刘昳，梁晓玲，许传超,等.建立可定量的视网膜新生血管小鼠模型的探索.眼科学报 2006;22(2):103106
7 Ha WJ, Yan H. The role of inflammationin diabetic retinopathy. Int J
Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi)2005;5(4):745749
8 Vadal M, Anastasi M, Lodato G, et al. Electroretinographic oscillatory potentials in insulindependent diabetes patients: A longterm followup. Acta Ophthalmol Scand2002;80(3):305309
9周正申，王玲,王康孙.激光对水肿视网膜的生物效应.中国实用眼科杂志 2003;21(8)：572575
10 The relationship of glycemic exposure(HbA1c) to the risk of development and progression of retinopathy in the diabetes control and complications trial. Diabetes1995;44(8):968983
11 Fuchs S, Baffour R, Zhou YF, et al. Transendocardial delivery of autologous bone marrow enhances collateral perfusion and regional function in pigs with chronic experimental myocardial ischemia. J Am Coll Cardio2001;37 (6):17261732
12 Banin E, Dorrell MI, Aguilar E, et al. T2TrpRS inhibits preretinal neovascularization and enhances physiological vascular regrowth in OIR as assessed by a new method of quantification. Invest Ophthalmol Vis Sci2006;47(5):2125213 上一页 [1] [2] |
