作者：关树文 王立成 杨明 陈晓光 赵晓明 李惟 王丽萍 作者单位：吉林大学生命科学学院，吉林 长春 130021
【摘要】 目的 探讨DhHP滴眼液对实验性半乳糖白内障的防治作用。方法 以亚血红素六肽为主要成分，配制DhHP滴眼液。用Wistar大鼠复制D半乳糖模型。 将实验分成6组：正常对照组，模型对照组，阳性对照组，模型给药组（分为高、中、低剂量组）。除正常对照组外，各组均腹腔注射D半乳糖进行白内障造模之后给予相应药物治疗。用裂隙灯显微镜动态观察各组动物晶状体混浊的发生时间及情况，并于实验第4周测定各组晶体的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、谷胱甘肽（GSH）的含量。及各组血清中SOD活性和MDA的含量。观察DhHP滴眼液对实验性半乳糖白内障的防治作用。结果 DhHP 滴眼液能明显延缓大鼠白内障晶状体混浊的发生时间；减轻白内障晶状体混浊程度；降低白内障晶状体 MDA的含量；提高白内障晶状体 SOD、GSHPx活性及 GSH含量。同时降低白内障大鼠血清中MDA含量、提高 SOD活性。结论 DhHP滴眼液具有较好地延缓和减轻半乳糖白内障的作用。其机制可能与DhHP 滴眼液有较强的抗氧化能力有关。
【关键词】 亚血红素；D半乳糖；白内障；抗氧化能力
由于白内障的氧化损伤机制已越来越多为人们所认识〔1〕，各种抗氧化剂类物质已被实验用于白内障的预防和治疗。然而，直到目前所有这些药物均未达到令人满意的效果〔2〕。近几年，酶学活性的抗氧化剂的开发越来越受到重视。细胞色素C水解而来的微酶MP8，MP9，MP11是较好的过氧化物酶模拟物〔3〕，在晶状体白内障模型中也验证了其抗白内障作用。但该类化合物不易制备和体内易降解、难溶于水的特点也极大地限制了它的应用。亚血红素短肽（DhHP6）〔4〕具有较高的过氧化物酶活性和对化学诱导大鼠晶状体白内障的保护作用〔5〕。本实验中，应用以DhHP6为主要成分的滴眼液，考察其对大鼠D半乳糖性白内障晶体及血清中抗氧化物质的影响，研究其对D半乳糖性白内障的作用机制，并客观评价其疗效。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
3 w龄健康Wistar大鼠，体重70～90 g，雌雄各半，购自长春高新医学动物实验研究中心，合格证编号为（吉）2003～0004。常规饲料,自由饮水。
1.1.2 DhHP滴眼液
以课题组研制的亚血红素六肽为主要成分〔4〕，配制成100、50、25 μg/ml三个浓度DhHP滴眼液，调节pH值与渗透压后分装，并经60Co照射(照射剂量:6 kGy),灭菌备用。
1.1.3 试剂
吡诺克辛钠滴眼液购自武汉远大制药集团股份有限公司；美多丽（托吡卡胺）购自日本参天制药株式会社；D半乳糖为上海恒信化学试剂有限公司产品；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）和谷胱甘肽(GSH)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.1.4 仪器
紫外可见分光光度计（美国Beckman公司），YZ5E型裂隙灯显微系统（苏州医疗器械厂）、低温高速离心机、 超净工作台、手术显微镜等。
1.2 方法
1.2.1 实验分组及给药
经裂隙灯显微镜检查,取双侧晶状体均无白内障的大鼠60只，随机分6组，为正常对照组，模型组，阳性对照组和给药组；给药组又分为DhHP高、中和低剂量组。每组10只,雌雄各半。大鼠白内障模型的建立参照文献方法〔6〕，除正常对照组腹腔注射等量生理盐水外，其余各组大鼠无菌腹腔注射50％D半乳糖无菌溶液，每日2次，注射剂量为10 g·kg-1·d-1，连续注射4 w。于诱发模型当日开始，正常对照组和模型组动物用生理盐水滴双眼，给药组分别用高、中、低剂量滴眼液点双眼，阳性对照组用53 μg/ml吡诺克辛钠滴眼液点双眼。以上各组均每日3次,每次每眼1滴。连续给药4 w。
1.2.2 晶状体检查与混浊分级
从实验开始起，除正常对照组外，其余各组大鼠每日用1％阿托品液散瞳，用裂隙灯显微镜观察检查晶状体的变化并同步摄影，作详细的文字记录，同时记录出现Ⅰ级混浊的时间。参考黄秀榕等的分期标准〔7〕，对晶状体混浊度分成0～Ⅴ级（0级：晶状体透明；Ⅰ级：晶状体周边皮质散在细小空泡；Ⅱ级：晶状体周边皮质成环状密集中等空泡；Ⅲ级：除晶状体周边皮质密集空泡外,部分皮质片状混浊；Ⅳ级：晶状体核及核周边皮混浊；Ⅴ级：晶状体完全混浊）。
1.2.3 大鼠晶状体生化指标测定
于实验开始后4 w脱颈椎法处死大鼠，摘除眼球,分离出晶状体，加入冷PBS缓冲液（pH7.4），制备匀浆，4℃ 10 000 r/min，离心15 min，取上清液待测。羟胺法测定SOD活性；二硫代二硝基苯甲酸法测定GSHPx活性及GSH含量；硫代巴比妥酸法测定MDA含量，上述生化指标均按试剂盒要求进行。同时取血，测血清中SOD活性和MDA含量。
1.3 统计学处理
实验数据以x±s表示，用SPSS软件处理。结果用轶和检验等级序值法。
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