作者：曾文妮 作者单位：深圳市福田人民医院眼科，广东深圳518033
【摘要】 目的 总结一中国汉族原发性闭角型青光眼大家系临床表型特点及遗传模式，并筛查在该家系成员中是否存在TIGR/MYOC基因第三外显子突变。方法 对该家系家庭成员进行眼科检查，包括视力、屈光检查、Goldmann压平眼压计测量眼压、房角镜检查、自动视野检查以及眼球A超检查。应用聚合酶链反应（PCR）扩增22名家系成员TIGR基因第三外显子，并对PCR产物进行测序分析。结果 原发性闭角型青光眼在此家族中呈常染色体显性遗传模式，其临床表型为慢性闭角型青光眼。与第6代成员相比，第4代及第5代成员的眼轴及前房较短，晶状体较厚。第4代成员的平均屈光状态为远视，第5代为正视，第6代为近视，但第6代中仍有一名成员为远视。家族的22名成员中未检测到TIGR基因第三外显子突变或单核苷酸多态性（SNP）。结论 在此中国汉族常染色体显性遗传原发性闭角型青光眼大家系中排除了TIGR基因第三外显子突变与青光眼发病之间的关系。
【关键词】 原发性闭角型青光眼 家系 TIGR基因 中国人
Family study and exclusion of mutation in exon 3 of the TIGR gene in a
Chinese primary angle closure glaucoma pedigree of the Han nationality
ZENG Wenni1, ZHANG Bin2, LI Jinying2, DING Kexi2, LIU Luling2,
FU Pei2, YUN Hongmin2*, SUN Jingjing3, CHEN Xiaoming4
（1.Department of Ophthalmology, Shenzhen People′s Hospital of Futian District, Shenzhen, Guangdong 518033, China;
2.Department of Ophthalmology, Shenzhen Hospital of Beijing University, Shenzhen, Guangdong 518036;
3.Institute of Life Science, University of South China, Hengyang, Hu′nan 421000;
4.Department of Ophthalmology, Huaxi Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan 610041）
Abstract: Objective To identify the hereditary mode and clinical features of the disease in a Chinese primary angle closure glaucoma (PACG) pedigree of the Han nationality and to screen the existence of exon 3 mutation of TIGR genes in this family. Methods A Chinese 7-generation PACG pedigree was enrolled in this study. The ophthalmologic examinations consisted of evaluation of visual acuity, refraction, Goldmann applanation tonometry, gonioscopy, automatic visual field test and A ultrasonography. The coding sequence of exon 3 of the TIGR gene was extended to 22 family members by polymerase chain reaction (PCR) using genomic DNA, followed by sequencing of the PCR products. Results The pedigree exhibited an autosomal dominant pattern of inheritance of PACG. The clinical features of PACG in this pedigree can be classified as chronic angle closure glaucoma. Relatively shorter axial length and anterior chamber depth with thicker lens were observed in the generations Ⅳ and Ⅴ than in the generation Ⅵ. The mean refraction status changed from hyperopic in generation Ⅳ to emmetropia in generation Ⅴ, while in generation Ⅵ, the mean refraction status was myopic, but still, there was one member in generation Ⅵ was hyperopic. Neither mutation nor SNP in exon 3 of the TIGR gene was detected in this pedigree. Conclusion The results of this study do not support a role of mutation in exon 3 of the TIGR gene in the pathogenesis of PACG inherited with an autosomal dominant pattern in this Chinese pedigree.
Key words: primary angle closure glaucoma; pedigree; TIGR gene; Chinese
在原发性闭角型青光眼患者及其家属中常可观察到眼前段结构的拥挤现象。在因纽特人中，原发性闭角型青光眼患者的一级亲属发病率比一般人群高3.5倍［1］，中国原发性闭角型青光眼患者的家族成员发病率则比一般人群高6倍［2］。Trnquist［3］在1953年首先提出存在一个原发性闭角型青光眼显性基因，但至今为止仍未发现原发性闭角型青光眼疾病基因或与之相关的候选基因位点。有关原发性开角型青光眼的分子遗传学研究则已明确了15个与开角型青光眼相关的基因位点，此外还有7个与其他类型青光眼致病相关的疾病基因也得到确认［4］。其中小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白（TIGR）基因，也称为MYOC基因。TIGR基因是目前为止研究最多的原发性开角型青光眼疾病基因［5］，在白人、亚裔人及非洲裔人中均发现了致病碱基改变，其中3%～5% 的成年性开角型青光眼患者存在该基因突变，而在青少年性开角型青光眼患者中其突变率为8%～36%。目前已报道的突变基因有70个，绝大部分致病突变基因位于第三外显子区域，与青少年性青光眼相关的突变基因则全部位于第三外显子与嗅球蛋白高度同源的片段［6-8］。
在近年来针对加拿大青光眼人群的基因型及表现型的研究中，发现在原发性闭角型青光眼患者中亦存在TIGR基因突变，Pro481Leu、Glu368STOP、Gly399Val均位于第三外显子区域，证明原发性闭角型青光眼患者也可携带TIGR基因突变。我们从2004年开始对一个连续7代患有原发性闭角型青光眼的家系进行了定期随访，我们认为在进行其他候选基因筛查及全基因组扫描前有必要首先筛查TIGR基因第三外显子，从基因学上确认所研究的家系属原发性闭角型青光眼家系。
1 资料和方法
1.1 一般资料 该原发性闭角型青光眼家系成员大部分居住于中国南部偏僻山区农村，该家族所有成员均为汉族且无近亲结婚史。家族中22名成员纳入本研究并在北京大学深圳医院眼科接受检查。所有参与此项研究的患者均签署了知情同意书，研究计划亦通过了医院道德委员会审批。
1.2 家系研究方法 眼科检查包括：视力及校正视力，屈光状态，眼前节裂隙灯显微镜检查，Goldmann压平眼压计测眼压，房角镜检查，眼底检查（90 D前置镜及检眼镜检查），自动视野计检查（Humphery field analyzer）,A型超声检查（Alcon Biophysic, OcuScan, Version 3.02）。所有家系成员（Ⅶ1因只有5岁故未接受检查）均接受以上检查，家系成员的疾病诊断及排除均由2名青光眼专业医师确认。其他信息如既往眼压及降眼压治疗或其他治疗、激光手术或其他抗青光眼手术史等也一并记录于档案中。
1.3 原发性闭角型青光眼诊断标准 ①青光眼性视盘改变，存在盘沿组织的缺失；②青光眼性视野改变，且与盘沿组织缺失相一致；③动态房角镜检查见房角关闭。对于存在上述诊断标准第3条但未见青光眼性视盘及视野改变的诊断为可疑原发性闭角型青光眼。已死亡患者的诊断根据其病史及手术记录。家系成员的精神疾病诊断依据其病史。
1.4 实验方法 抽取2名家系成员外周静脉血，采用TIANamp Genomic DNA Kit(北京天根生物有限公司)从300 μl全血中抽提基因组DNA，采用PCR 方法扩增涵盖TIGR基因第三外显子的927 bp的片断，正向及反向引物分别为:5′-GCTGTCACATCTACTGGCTC-3′和5′-ATCTCCTTCTGCCATTGCCT-3′。 反应体系为50 μl，其中包括100 ng基因组DNA，5 μl 10×pfu缓冲剂，4 μl 25 mol/L Mg2+，1.2 μl 10 μmol/L引物，1 μl 10 mmol/L dNTP，及1.25 U pfu DNA 聚合酶(MBI，Lithuania)。PCR反应程序为： 95℃变性2 min；随后35个循环，包括95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸2 min；最后72℃延伸5 min 完成全部过程。 PCR产物长度为927 bp，以1.5%琼脂糖凝胶电泳进行产物分析，以紫外线凝胶照相系统（BIO-RAD公司）记录结果。只有结果显示无非特异性扩增的产物在进一步纯化（DNA Gel Extraction Kit，上海晶泰生物技术有限公司)后进行DNA双向测序。 双向测序所使用的引物为5′-ACTGGCTCTGCCAAGCTTCC-3′及5′-GCTGAATACCGAGACAGTGA-3′, 使用仪器为Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer (ABI公司)，并使用其附带软件Sequencing Analysis Software 5.2.0进行分析。
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