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2 结 果
36例患者的临床标本经PCR扩增真菌阳性31例，阳性率为86.1%；真菌培养阳性率为58.3%(其中镰刀霉属13例、链格孢属3例、曲霉属2例、青霉属1例、无孢菌属1例、念珠菌属1例)，临床标本真菌培养与PCR真菌扩增阳性结果比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。以真菌培养为“金标准”，PCR扩增准确性72.2%，敏感性100.0%，特异性33.3%表1 真菌培养与PCR扩增结果比较 注：与真菌培养比较，*χ2＝8.1000，P＜0.05
3 讨 论
真菌性角膜溃疡是角膜病中致盲性眼病之一，目前实验室诊断方法：角膜刮片直接镜检阳性率低，培养法虽是“金标准”，但耗时长［6］，PCR技术可体外大量扩增已知序列的DNA片段，使得极微量的DNA可在紫外线下被直接观察到，具有操作简单，敏感性高和准确性可靠等优点，因此近年来真菌性角膜溃疡的PCR检测越来越受到人们的重视。
我们利用真菌18srRNA高度保守区而设计通用引物A1(5'ATTCCTCGTTGAAGAGCA3')和A2(5'ACTCAACACGGGGAAACT3')对多种菌种进行PCR扩增实验，结果该引物对真菌组标本均能扩增，但不能扩增出其他菌种，证明此真菌通用引物具有高度特异性；对临床上拟诊为真菌性角膜溃疡的36例标本进行PCR检测，并与培养方法对比，PCR检测结果31例阳性，扩增阳性率为86.1%，而真菌培养21例阳性，阳性率为58.3%，PCR扩增与真菌培养方法比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，PCR扩增阳性率明显高于培养法，说明PCR方法具有很高的检出率。以真菌培养为标准，PCR敏感性100.0%，显示PCR扩增具有高度敏感性。真菌培养的10例阴性中，有5例患者已有过不正规抗真菌药物治疗，考虑可能抑制了真菌生长，导致真菌培养均为阴性；另5例培养阴性的患者，考虑不易生长的真菌在临床常用普通真菌培养基上很难观察到，而利用PCR方法可以鉴定这些少见致病真菌［7］，同时特异性降低，只有33.3%，我们考虑采集标本时存在污染，应加强实验前质量控制。在检测时间上，真菌培养可以鉴别菌种，进行药敏实验，为临床药物治疗提供依据，但是真菌培养耗时长，一般需要7～10 d才能确定是否为真菌感染，而PCR技术可直接对患者角膜溃疡标本提取DNA，PCR扩增，1 d即可出具检验报告，其显著优点是敏感、快速。
综上所述，本实验对临床上36份拟诊为真菌性角膜溃疡的标本进行检测，培养阳性的标本PCR检测也呈现阳性，从而确认PCR检测结果的正确性；PCR需要1 d，而真菌培养鉴定需要7～10 d，PCR所需时间明显少于真菌培养鉴定的时间，有助于真菌性角膜溃疡的快速诊断；PCR扩增阳性率明显高于培养法；本实验采用真菌通用引物进行PCR，只能扩增出真菌，不能确定是某个菌属，采用PCR技术确定菌属将是我们下一步研究方向。因此，应用PCR方法检测临床拟诊为真菌角膜溃疡患者快速、灵敏、特异，对患者的早期诊断和及时治疗具有重要意义。
【参考文献】
1 Cami J,Farre M.Drug addiction［J］.N Engl J Med，2003,349(10):975985.
2 曾静,黄明汉,王冬梅.真菌性角膜溃疡45例临床分析［J］.国际眼科杂志,2008,8(4):830831.
3 廖源.伊曲康唑配合氟康唑滴眼治疗真菌性角膜溃疡25例临床观察［J］.疑难病杂志，2008，7(2)：107.
4 刘素玲，冉玉平，曾蔚，等.一种适合于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法［J］.中国真菌学杂志，2006，1(6)：340342.
5 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版，南京：东南大学出版社，2006：934938.
6 Liesegang TJ.Fungal keratitis//Kaufman HE,Barron BA,McDonald MB,eds.The Cornea［M］.2nd eds.Boston:Butter worthheinemann,1998:219246.
7 Mancini N,Ossi CM,Perotti M,et al.Direct sequencing of Scedosporium apiosperm um DNA in the diagnosis of a case of keratitis［J］.J Med Microbiol,2005,54(9):897900. 上一页 [1] [2] |
